همسانه سازی ناحیه ژنی ndhB-rps7 از ژنوم کلروپلاستی پنبه جهت رخداد نوترکیبی همتا در انتقال ژن(ها) به کلروپلاست پنبه و گونه های خویشاوند

پنبه مهمترین گیاه لیفی است و در میان این گیاهان بیشترین دستورزی ژنتیکی روی آن انجام شده است. در این زمینه پلاستیدها به دلیل داشتن برتری های متعدد برای کشاورزی مولکولی معرفی شده اند. یکی از عوامل موثر در ترایختی پلاستیدی به کارگیری نواحی جناحین مناسب در ناقل های تراریختی می باشد و همین نواحی وقوع پدیده نوترکیبی همتا را میسر می سازند و منجر به درج دقیق ژن بیگانه می شوند. در این پژوهش با بررسی ژنوم کلروپلاستی پنبه برای اولین بار ناحیه ndhB-rps7 انتخاب گردید و تکثیر اختصاصی این قطعه توسط PCR انجام گرفت. طی واکنش اتصال، قطعه هدف در ناقل همسانه سازی pTG19 قرار گرفت و به سلول های مستعد باکتری E. coli سویه DH5α تراریخته شد. پلاسمیدهای استخراجی جهت توالی یابی به شرکت ژن فن آوران ارسال گردید. مقایسه نتایج حاصل از توالی یابی تسابه بالای 99 درصد با توالی مرجع نشان داد و یک جهش نوکلیوتیدی در ژن rps7 مشاهده شد و مقایسه اسید آمینه ناحیه تغییر یافته با اسید آمینه ژن اصلی نشان داد این نوع تغییر نوکلیوتیدی منجر به تغییر اسید آمینه ای نمی شود. از مقایسه توالی همسانه سازی شده با اطلاعات موجود در سایت NCBI، تشابه 99 درصدی با چندین گونه گیاهی مشاهده گردید که در همه آنها تفاوت تک نوکلیوتیدی در ژن rps7 وجود داشته ولی در هیچ کدام رمز اسید آمینه تغییر نمی کند. این نتایج نشان می دهند که ناحیه ndhB-rps7 می تواند به عنوان نواحین جناحین با کارایی نوترکیبی بالا در ناقل های پلاستیدی گونه های G. sturtianum ،G. robonsonii ،G. barbadens و کاکایو (Theobroma cacao) نیز استفاده شوند.

کلیدواژه ها:

تراریختی پلاستیدی ، ناقل همسانه سازی ، نواحی جناحین ، نوترکیب همتا