دخالت متالوپروتیین MSD1در مکانیسم مقاومت به شوری بوسیلهمیانکنش با SSOS3

در بین تنش های مختلف، تنش شوری تهدید بزرگی برای گیاه محسوب میشود و مطالعه مکانیسمتحمل شوری در گیاه حایز اهمیت است. در یکی از مسیرهای تحمل شوری در گیاه مدلآرابیدوپسیس، پروتیین ( Salt Overly Sensitive3 (SOS3که یک حسگر یون های کلسیم وآغازگر مسیر تحمل شوری است با تشکیل کمپلکس SOS3-SOS2موجب فعال سازی فرایندهایمختلف به منظور تحمل شوری می شود. از سوی دیگر، رادیکالهای سوپراکسید که در تنش هایمختلف ازجمله تنش شوری تولید میشود برای سلول مضر بوده و بایستی از بین بروند. چگونگیحذف این رادیکال های سوپراکسید و حفظ سلول از آسیب های اکسیداتیو در گیاهان مقاوم بهشوری مشخص نیست. در این تحقیق، با کارگیری روش Yeast Two Hybrid System با ناقلهایAH109 سویهSaccharomyces cerevisiae و دوبل تراریزش مخمر(Y2HS) pGBT9-SOS3 و pGADT10-AtcDNA میانک نش های پروتیینی SOS3در میان کتابخانه cDNAآرابیدوپسیس جستجو گردید. از چهار کلنی بدست آمده در روی محیط کشت انتخابی SD-AHWL استخراج DNAانجام و پس از تکثیر ناقل pGADT10-AtcDNA آنها در E. coliتوالییابی صورت گرفت و در بانک اطلاعات آرابیدوپسیس BLASTشد. یکی از مهمترینManganese Superoxide Dismutase 1 (MSD1) میان کنش های یافت شده مربوط به پروتیینبود. MSD1واکنش خنثی سازی رادیکال های سوپراکسید برای حفاظت گیاه از آسیبهایاکسیداتیو ناشی از استرسها را به عهده دارد. میانکنش و بکارگیری MSD1توسط SOS3درمسیر مقاومت به شوری موجب نجات گیاه از آسیبهای اکسیداتیو میشود. در ادامه، میانکنش SOS3-MSD1با جداسازی و همسانه سازی cDNA کامل MSD1در ناقل های دوبل هیبرید مخمرتایید شد. همچنین به کمک تکنیک GST-Pull Downنشان داده شد که پروتیین SOS3تولیدشده در باکتری از روی pGEX2TK-SOS3و پروتیین نشاندار MSD1تولید شده از روی pGBKT7-MSD1بصورت مستقیم باهم میانکنش دارند. این اولین گزارش از برهمکنش مسیرتحمل به شوری (SOS3)با مسیر حذف یونهای مضر سوپراکسید (MSD1)میباشد که مکانیسممولکولی این دو مسیر را بهم مرتبط میسازد

کلیدواژه ها:

سیستم دوبل هیبرید مخمر ، SOS3 ، شوری ، منگنزسوپراکسیددسموتاز ، GST-Pull Down