جداسازی، کلون کردن و تعیین توالی ژن β-1,3 glucanase قارچTrichoderma virens در راستای ایجاد مقاومت در گیاه نخود علیه قارچهای Fusarium oxysporum و Ascochyta rabiei

قارچ Trichoderma virens بدلیل تولید آنزیمهای گلوکانازی بعنوان یک عامل در کنترل بیولوژیک بیماریهای قارچی گیاهی مورد استفاده قرار می گیرد. لذا جهت تکثیر و مطالعه ژن β-1,3 glucanase، استخراج DNA ژنومی از این قارچ صورت گرفت. سپس تکثیر ژن β-1,3 glucanase (بطول حدود bp 2350) با استفاده از پرایمرهای Fbgn1 و Rbgn1.1 صورت گرفت. محصولPfu- polymerase تکثیر شده پس از هضم آنزیمی، در سایت XbaI وکتور pUC18 کلون گردید. پلاسمیدهای نوترکیب از باکتری های E.coli DH5 ترانسفورم شده استخراج و در دو جهت تعیین توالی گردیدند. مقایسه حدود bp1600 از این توالی با توالی ثبت شده این ژن در بانک ژنی نشان داد که قطعه کلون شده، مربوط به ژن سنتز کننده آنزیم β-1,3 glucanase می باشد. ژن کلون شده از pUC18، جایگزین ژن GusA در وکتور بیانی گیاهی pBI121 گردید. این construct می تواند جهت انتقال ژن مذکور به نخود جهت ایجاد مقاومت علیه قارچهای بیماریزا (Fusarium oxysporum و Ascochyta rabiei) که در دیواره خود گلوکان دارند مورد استفاده قرار گیرد.

کلیدواژه ها:

Trichoderma virens ، β-1 ، 3 glucanase ، نخود ، Fusarium oxysporum ، Ascochyta rabiei