تولید آنتی بادی های پلی کلونال علیه پروتئین های کدشده توسط ژن های ناحیه اختصاصی مردان در کروموزوم Y انسان

کروموزوم Y در انسان برای تمایز و شکل گیری بیضه و نیز اسپرماتوژنز ضروری است. بنابراین، بررسی بیان پروتئین های بیان شونده توسط این کرموزوم در بافت های گوناگون به ویژه بافت بیضه از اهمیت ویژه ای برای درمان بیماران مبتلا به ناهنجاری های مربوط به کروموزوم Y و نیز تعیین نقش احتمالی آنها برخوردار است. لازمه بررسی بیان و عملکرد پروتئین ها استفاده از آنتی بادی های باقدرت اتصال اختصاصی بالا می باشد. از این رو، این طرح به تولید آنتی بادی های پلیکلونال مناسب برای ژن های ناحیه اختصاصی مردان در کروموزوم Y اختصاص یافت. بدین منظور نواحی اختصاصی پروتئین ها با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیکی جهت استفاده به عنوان آنتی ژن طراحی گردید. سپس استخراج RNA و ساخت cDNA از بافت های بیضه، پروستات ولاین های سلولی انجام گرفت و پس ازکلون بخش های مربوطه بر روی وکتور بیانی پروکاریوتی pET-28a، پروتئین نوترکیب آنها تولید و با استفاده از ستون های کرموتوگرافی خالص سازی شد. در نهایت پروتئین های خالص سازی شده پس از تایید توسط روش طیف سنجی جرمی درفواصل زمانی معین به خرگوش های نژادسفید نیوزلندی تزریق و پس از اتمام این ایمن سازی، عمل خونگیری و جداسازی سرم انجام گرفت. در پایان کیفیت آنتی بادی های تولیدی با استفاده از روش های الایزا، ایمنو هیستو شیمی و وسترن بلات بررسی گردید.

کلیدواژه ها:

آنتی بادی پلی کلونال ، کلونبنگ ، ناباروری ، ناحیه اختصاصی کروموزوم Y