جداسازی و همسانه سازی ژن بیماری زای pthA در باکتری زانتوموناس آکسنوپودیس پاتووار سیتری

زانتوموناس ها گروهی از باکتری های گرم منفی بیماری زای گیاهی هستندو مانند سایر باکتری های گرم منفی از سیستم خاصی برای ایجاد بیماری استفاده می کنند. از آنجایی که در ایران مرکبات یکی از محصولات مهم زیرکشت است، بنابراین باید به طور خاص به بیماری هایی که مرکبات را درگیر می کند توجه کرد. یکی از این بیماری ها شانکر مرکبات می باشد که توسط زانتوموناس آکسنوپودیس سیتری ایجاد می شود. بنابراین در این پروژه ما براین شدیم که به صورت خاص به این بیماری بپردازیم و راهکاری مناسب برای مبارزه با آن پیدا کنیم. در این بیماری باکتری برگ ها، ساقه ها، و میوه ها را آلوده می کند. این بیماری انواع متنوعی دارد. پنج نوع از این بیماری وجود دارد، که فرم *A از این بیماری در ایران مشاهده می شود. ارتباط بین باکتری های گرم منفی بیماری زای حیوانی و گیاهی با میزبانشان بستگی به یک نوع سیستم محافظت شده به نام سیستم ترشح پروتئین نوع سه (TTSS) دارد. کلاستری که سیستم ترشحی نوع سه را کد می کند hrp نام دارد. افکتور پروتئین ها به وسیله این سیستم به داخل سلول گیاهی وارد می شوند. یکی از این افکتور پروتئین ها پروتئین PthA است که توسط ژن PthA کد می شود. PthA اولین عضو خانواده ی avrBs3/pthA می باشد که مهم ترین عامل بیماری زای را نشان می دهد. هدف از تحقیق حاضر جداسازی و همسانه سازی ژن pthA می باشد. برای این منظور ابتدا ترادف کد کننده ی ژن مذکور از منابع بانک ژن استخراج گردیده و پرایمرهای اختصاصی مربوطه برای جداسازی آن طراحی گردید. جداسازی و تکثیر ژن مربوطه با روش PCR صورت گرفته و به منظور تولید انبوه پروتئین نوترکیب ، همسانه سازی دروکتور بیانی صورت پذیرفت. تایید مراحل جداسازی و همسانه سازی با استفاده از روش های تکمیلی مولکولی و تعیین ترادف انجام پذیرفت.

کلیدواژه ها:

شانکر باکتریایی ، آکسنوپودیس سیتری ، خوشه ی ژنی hrp ، ژن pthA ، خانواده ی .avrBs3/pthA