جداسازی و همسانه سازی ژن مولد پیلوس سیستم ترشحی نوع 3 باکتری زانتوموناس آکسنوپودیس پاتووار سیتری

مرکبات یکی از مهم ترین محصولات کشاورزی و دارای اهمیت اقتصادی در ایران هستند. از جمله مهم ترین بیماری های مرکبات در ایران بیماری شانکر باکتریایی مرکبات می باشد که توسط باکتری زانتوموناس آکسنوپودیس پاتووار سیتری ایجاد می شود. این باکتری دارای پاتووارها و تیپ های مختلفی می باشد که هریک ازآنها فرم خاصی از شانکر مرکبات را ایجاد می کنند. سویه ی A* از باکتری Xac تنها بر روی لیمو ترش اثر داردو از ایران، عمان، عربستان سعودی و هند گزارش شده است. این بیماری سبب ایجاد زخم هایی بر روی برگ، ساقه ومیوه ی درختان مرکبات می شود و در نهایت میوه هایی ایجاد می شود که بازار پسندی چندانی ندارند. بیشتر باکتری های بیماری زای گیاهی دارای سیستم ترشحی تیپ ΙΙΙ می باشند که به وسیله ی خوشه ی ژنی hrp، به طول 23kb کد می شود. این سیستم برای ایجاد بیماری در گیاهان میزبان و ایجاد پاسخ های فوق حساسیت در گیاهان مقاوم لازم است. این سیستم دارای یک ساختار رشته ای خارج سلولی به نام پیلوس است که مانند یک مجزا پروتئین های باکتریایی را به داخل سیتوزول سلول گیاهی وارد می کند. جزء اصلی پیلوس، پروتئین HrpE است که به وسیله ی قطعه ی ژنی hrpE کد می شود. هدف از تحقیق حاضر جداسازی و همسانه سازی ژن hrpE می باشد. برای این منظور ابتدا ترادف کد کننده ی ژن مذکور از منابع بانک ژن استخراج گردیده و پرایمرهای اختصاصی مربوطه برای جداسازی آن طراحی گردید. جداسازی و تکثیر ژن مربوطه با روش PCR صورت گرفته و به منظور تولید انبوه پروتئین نوترکیب، همسانه سازی در وکتور بیانی صورت پذیرفت. تاییدمراحل جداسازی و همسانه سازی با استفاده از روش های تکمیلی مولکولی و تعیین ترادف انجام پذیرفت.

کلیدواژه ها:

شانکرباکتریایی مرکبات ، زانتوموناس آکسنوپودیس پانووارسیتری ، خوشه ی ژنی hrp ، ژن hrpE ، پیلوس