بیان آنزیم لیپاز کوتاه شده Bacillus thermocatenulatus در مخمر Pichia pastoris

لیپازها یکی از پرکاربردترین آنزیم ها در صنایع بیوتکنولوژی و شیمی آلی هستند. به عنوان سومین آنزیم صنعتی اهمیت فراوانی داشته و مطالعات بسیاری بر روی آنها در حال انجام می باشد. لیپازهای باکتریایی عضوی از خانواده α/β هیدرولازها هستند که تری گلیسریدها را در حدفاصل آب و چربی کاتالیز و هیدرولیز می کنند. اغلب لیپاز های گرمادوست پایداری بالایی در دماهای بالا و حلال های آلی نشان می دهند و به همین علت در بررسی های ساختاری و کاربرد های صنعتی در مرکز توجه قرارگرفته اند. مقایسه ی ساختاری α/β هیدرولازها با لیپازهای باسیلوس نشان می دهد که دامنه X 3 طی تکامل وارد ساختار لیپازهای باسیلوس شده است. در این تحقیق دامنه X 3 از ساختار ژن لیپاز باکتری Bacillus thermocatenulatus به منظور بررسی اثر آن بر فعالیت آنزیم با روش SOE-PCR حذف گردید سپس ژن تغییر یافته btl 2 در وکتور کلونینگ pPTZRT/57 و سپس وکتور بیانی pPICZαB کلون و پس از خطی شدن با روش الکتروپوریشن به مخمر Pichia pastoris GS115 انتقال داده شد. مخمر نوترکیب Pichia pastoris در محیط YPD کشت داده و با افزودن متانل به محیط کشت بیان لیپاز القاء شد. بررسی محیط کشت با الکتروفورز و تست پارانیتروفنیل پالمیتات تولید و ترشح لیپاز به محیط کشت را تایید کرد.

کلیدواژه ها:

BTL بیان ، 2 ، Pichia pastoris ، Bacillus thermocatenulatus ، لیپاز