بررسی توسعه کالوس جداکشت ها و تعیین حد آستانه تحمل گیاهچههای تراریخت در محیط واجد گزینشگر گلایفوسیت با هدف بهینه سازی غربالگری با ناقل های جدید واجد ژن گزینشگرEPSPS

به دلیل نگرانی های زیست محیطی، حذف نشانگرهای آنتی بیوتیکی از ناقلین مورد توجه قرار گرفته است. در این راستا ناقلین گیاهی که بتوانند از ژن های مقاومت به علف کش هایی با طیف وسیع و ایمن از لحاظ زیستی، نظیر گلایفوسیتRoundup R به عنوان عامل گزینشگر استفاده کنند، مورد توجه قرار گرفته اند. در این تحقیق بهینه سازی مراحل غربالگری با استفاده از ناقلین جدیدpSA105 واجدژن جهش یافتهEPSPSبه عنوان ژن نشانگر گزینشگر به جای آنتی بیوتیک انجام گرفت. ناقلpSA105یک ناقل بیانی جدید گیاهی است که کاست ژن مسئول مقاومت به گلایفوسیت5-enolpyrovylshikimate-3-phosphate synthase) EPSPS با طولی حدود 3500 جفت نوکلئوتید در آن به عنوان عامل گزینشگر قرار گرفته است. پس از انتقال این ناقل به رقم سامسون گیاه توتون Nicotianatabacum var. Samsun با استفاده از سویهAgrobacterium tumefaciens LBA4404بررسی های مولکولی به منظور تایید حضور و بیان ژن گزینشگر صورت گرفت. در آزمون توسعه کالوس، باززایی در جداکشت های گرفته شده از گیاهچه های تراریخت درغلظت0/1میلی مولار گلایفوسیت مشاهده شد، در حالی که در نمونه های شاهد هیچ گونه باززایی مشاهده نشده و تمامی جداکشت هااز بین رفته بودند. در آزمون تعیین حد آستانه مقاومت، بعد از گذشت سه هفته، تمامی گیاهچه های تراریخت در غلظت0/4میلی مولارگلایفوسیت (تامین شده از طریق علف کش رانداپ در محیط کشت) زنده مانده و اکثر گیاهچه های تراریخت در غلظت0/7mMگلایفوسیت نیز مقاومت نسبی داشته و زنده بوده در حالی که گیاهچه های شاهد در غلظت 0/1mM گلایفوسیت کاملاً از بین رفته بودندبر این اساس پروتکل غربالگری در صورت استفاده از ناقل های واجد این ژن نشانگر گزینشگر به این صورت پیشنهاد می شود که بعد ازمرحله همکشتی، جداکشت ها در محیط واجد غلظتmM 0/1 گلایفوسیت تامین شده از منبع علفکش راندآپ قرار گرفته و گیاهچه های حاصل از این جدا کشت ها به محیط واجد غلظتmM0/4گلایفوسیت منتقل شود. انتظار می رود در این روش غربالگری گیاهچه های تراریخت امکان رشد داشته باشند

کلیدواژه ها:

کشت بافتpSA105 ، بهینه سازی پروتکل ، گلایفوسیت ، EPSPS