تعیین ماهیت ژنومی باکتریوفاژ لیتیک اختصاصی جداسازی شده علیه سالمونلا انتریتیدیس

اهداف: تنوع ژنتیکی باکتریوفاژها قابل ملاحظه میباشد و آنها میتوانندDNAیاRNA داشته باشند. در مطالعات قبلی، باکتریوفاژ لیتیک جدیدی جداسازی و کارایی آن در پیشگیری از بیماری سالمونلوز در طیور به اثبات رسید. هدف این مطالعه تعیین ماهیت ژنتیکی فاژجداسازی شده میباشد.مواد و روشها: استخراج ژنوم باکتریوفاژ با استفاده از فرمامید انجام شدEDTA(0.5 M, pH 8.0) ،Tris (2 M, pH8.5 فرمامید و فاژ به ترتیب به نسبت حجمی0/1و0/05و1و1مخلوط شدند و این سوسپانسیون به مدت 30 دقیقه در دمایدرجه سانتیگراد37 انکوبه شد. سپس ژنوم فاژبا استفاده از آب دو بار تقطیر و اتانول به نسبت 1 به 6 رسوب داده و به مدت 1 ساعت در دمایoC-20 نگهداری شد. با سانتریفیوژنمودن میکروتیوب حاوی این سوسپانسیون به مدت 5 دقیقه درrpm5000 ، پلیت ژنومی فاژ جمع آوری شد. محلول رونشست دور ریخته شد و میکروتیوبها به صورت در باز به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق قرار گرفتند. پلیت ژنومی فاژ با استفاده از اتانول 70 درصد دو بارشسته و در 300 میکرولیتر بافرTEحل شد. با استفاده ازDNase I و ribonuclease Aنوکلئیک اسید جداسازی شده فاژ طبق دستورالعمل شرکت سینا کلون هضم شد. محصول هضم آنزیمی نوکلئیک اسید جداسازی شده فاژ با استفاده از ژل آگاروز 1 درصد الکتروفورز شد. نتایج: روش جداسازی ژنوم فاژ استفاده شده در این پژوهش، قابلیت استخراج مقدار کافی ژنوم قابل رویت ر ا بر ژل آگاروز داشت

کلیدواژه ها:

باکتریوفاژ ، سالمونلا انتریتیدیس ، تعیین ماهیت ژنومی ویروس