طراحی بیوسنسورDNAنانوذرات طلا بر پایه شناسایی ژنMultiple Insertion Elementبمنظور تشخیص تفریقی گونه های بروسلا

بروسلوز یک بیماری مشترک جهانی است که توسط باکتری های درون سلولی لختیاری از جنس بروسلا ایجاد می شود. گونه های شناسایی شده بروسلا دارای شباهت ژنتیکی و ایمنوژنیک بالایی هستند. روش متداول شناسایی و تفریق جنس های بروسلا غالبا زمانبر، نیازمند ک اربر ماهر وتجهیزات گرانقیمت بوده و با خطر بالای اکتساب عفونت آزمایشگاهی همراه می باشند. روشهای متداول اختصاصی و مبتنی برPCRمانندPCRزمان حقیقی که امکان تشخیص تفریقی جنسها را فراهم می آورد نیازمند تجهیزات گران قیمت و روشهای پیچیده آنالیز هستند. در مطالعه حاضر یک بیوسنسور حساس، اختصاصی و سریع بر پایه شناسایی لوکوس ژنیMIEبا استفاده از تجمعات القایی با نانو ذرات طلا بمنظور شناسایی 4 گونه اصلی جنس بروسلا شاملB.suis و B. canis ،B.abortus ،B. Melitensisطراحی گردید. پروب های اولیگونوکلئوتیدی اختصاصی گونهbp30 ) مکمل بخشی از ژنMIEدارای کلاهک تیول در دو انتهای ' 3 و ' 5 به نانوذرات طلا با قطر 20 الحاق شدند. نمونه هایDNAپس از انجامPCRو نیز نمونه هایDNAتام خالص سازی شده از باکتری های مورد مطالعه و برش داده شده با آنزیمEcoRIپس از مجاورت با پروب طراحی شده از نظر تغییر رنگ از قرمز به آبی مورد ارزیابی قرار گرفتند حداقل غلظت قابل شناساییDNAبا استفاده از94/8μg/ml PCR بود در حالیکه حد اقل غلظت قابل شناسا یی با استفاده از پروب نانوذراتμg/ml21/8بود. تفریق گونه های مختلف بر پایه واکنش پروب با ژنMIEپس از هضمDNAژنومی با انزیمEcoRIبا حداقل غلظتμg/ml99/5امکانپذیر بود. 4 گونه جنس بروسلا با استفاده از نانوپروب طراحی شده به صورت اختصاصی و چند واکنشی قابل تفریق بودند. حساسیت روشطراحی شده96/2%و اختصاصیت آن97/9%بدست آمد.

کلیدواژه ها:

بروسلا ، بیوسنسور ، نانوذرات طلا ، ژنMultiple Insertion Element