کشت جنین گندم و بررسی بیان ژن های مقاومت به سرما در لاین دابل هاپلویید حاصل از حذف کروموزومی (Real Time PCR)

تنش های محیطی، از جمله سرما، سبب کاهش معنی داری در عملکرد محصولات کشاورزی می شوند. برخی دانشمندان معتقدند که پتانسیل ژنتیکی برای عملکرد بالا در بسیاری از ارقام فعلی گندم وجود دارد. تحقیق حاضر به منظور بررسی تغییرات بیان ژن های مقاومت به سرما در لاین دابل هاپلوئید گندم تحت تیمار سرمایی انجام گرفت. بذر بالغ گندم با استفاده از اتانول ۷۰ درصد برای ۵ دقیقه استریل شده چندین بار با آب دیونیزه شسته شد تا آلودگی های سطحی بذور از بین بروند. سپس این بذور برای آبگیری به مدت ۲ ساعت در دمای اتاق رها شدند. برای القاء کالوس زایی جنین های بالغ زیر هود استریل با اسکاپل جدا شده و در محیط کشت حاوی ۲ میکروگرم بر لیتر ۲-۴-دی کشت داده شدند سپس به مدت ۱۰-۱۵ روز در دمای ۲۵ درجه سانتی گراد و تاریکی نگهداری شدند. بعد از رشد، کالوس ها جدا شده به مدت حدود ۳ هفته در محیط کشت MS بدون هورمون با ۳۰ گرم بر لیتر ساکاروز و ۸ گرم بر لیتر آگار در شرایط دمای ۲۵ درجه سانتی گراد و ۱۶ ساعت روشنایی رشد داده شدند. تولید گیاهان هاپلوئید در یک نسل، دابل هاپلوئیدها (تهیه شده از مرکز ملی ذخایر زیستی و ژنتیکی ایران کرج) از میکروسپور از طریق آندروژنز انجام گرفت. سپس از جنین هاپلوئید تیمار شده با سرما استخراج RNA انجام گرفته با القای کیت cDNA، Reverse Transcriptase PCR تهیه و بیان ژن های LEA و HVA۱ با Real Time PCR سنجیده شد. با توجه به نقش ویژه ژن های LEA و HVA۱ در مقاومت در مقابل تنش های محیطی از جمله تنش سرمایی در گیاهان، به ویژه غلات، افزایش بیان این ژن ها در مطالعه حاضر جالب است. مطالعات بعدی در سطح بیان و رونویسی می تواند به شناسایی بیشتر مکانیسم عملکردی ژن های فوق در القای سرماسازگاری در گیاهان کمک کند.

کلیدواژه ها:

لاین دابل هاپلوئید ، HVA۱ ، LEA ، تنش سرمایی