ترنسداکشن پایدار ترنسژن GFP در سلول سخت ترنسفکت ماکروفاژ موشی RAW۲۶۴.۷ با استفاده از وکتورهای نسل دوم لنتی ویروس

مقدمه: سلولهای ماکروفاژی، دسته­ای از سلولهای سخت ترنسفکت می­باشند که بدلیل اهمیت هدفگیری آنها در استراتژیهای درمانی، پیاده­سازی یک روش موفق ترنسفکشن در آنها همواره مدنظر می باشد. مواد و روشها: کارایی وکتورهای لنتی­ویروسی در مقایسه با سه ترکیب تجاری Xfect™ Transfection Reagent، FuGENE® HD  و Lipofectamine TM ۳۰۰۰ در ترنسفکشن سلول ماکروفاژی RAW۲۶۴.۷ بررسی گردید. بعد از بهینه­سازی و تولید ذرات ویروسی در سلول ۲۹۳T، آلوده­سازی سلولی با MOIهای متفاوت صورت گرفت و میزان کارایی ترنسداکشن، زنده­مانی و فعالیت متابولیک سلولها اندازه­گیری و با روشهای شیمیایی مقایسه گردید. نتایج: هیچیک از سه ترکیب شیمیایی تجاری قادر به ترنسفکت موفق RAW۲۶۴.۷ نشدند در حالیکه روش ویروسی در کمترین غلظت نیز قادر به ترنسداکشن سلولها و ایجاد سیگنال سبز رنگ در زیر میکروسکوپ فلورسنت گردید. تغلیظ استوک ویروسی و بکارگیری MOIهای بیشتر تا ۳۰ بطور معنی داری (p≤۰.۰۰۰۱) باعث افزایش راندمان ترنسداکشن گردید. بحث: روش ترنسفکشن لنتی ویروسی علی رغم کار زیاد و زمان طولانی­تر در مقایسه با روشهای شیمیایی جهت ترنسفکشن سلولهای سخت ترنسفکت کارایی بالاتری دارد که در این تحقیق انجام برخی اصلاحات نظیر تغلیظ ویروس، عدم فریز ویروسها، استفاده از پلی برن و انکوباسیون شبانه سلولها با ذرات ویروسی کارایی آنرا افزایش داد. از آنجا که پارامترهای مهم دیگری مانند استفاده از رترونکتین و سانتریفوژ چند ساعته ویروس و سلول در کنار هم (اسپینوکولیشن)، بر روی فرایند آلوده سازی ویروسها بسیار موثرند، پیشنهاد می شود در مطالعات بعدی مدنظر قرارگرفته و با توجه به داده های امیدوارکننده این تحقیق، از این روش تکمیلی برای ترنسداکشن دیگر سلول های سخت ترنسفکت مانند سلول های بنیادی یا سلول های اولیه نیز استفاده شود.

کلیدواژه ها:

Transfection ، Transduction ، RAW۲۶۴.۷ ، Difficult-to-transfect cells ، Lentiviral vector ، MOI ، ترنسفکشن ، ترنسداکشن ، RAW۲۶۴.۷ ، سلول سخت ترنسفکت ، وکتور لنتی ویروس ، MOI