ردیابی ویروس زردی غربی چغندرقند در مزارع یونجه با استفاده از تکنیک RT-PCR-RFLP

علائم زردی در یونجه (Medicago sativa) توسط چندین ویروس مختلف از جمله ویروس زردی غربی جغندرقند (Beet western yellows virus-BWYV-USA) متعلق جنس Polerovirus از خانواده Luteoviridae ایجاد می گردد. در این بررسی از مزارع یونجه دو استان ایلام و لرستان بازدید و 132 نمونه (از هر استان 66 نمونه) با علائم زری و کوتولکی جمع آوری گردید. آزمون سرلوژیکی نمونه های مورد نظری با استفاده از آنتی بادی تک همسانه ای علمی ویروس مورد نظر و روش لکه گذاری روی غشا ؟؟؟ و سلولز انجام گرفت. نتایج آزمون سرولوژی نشان داد که استان لرستان با 39/4 درصد دارای آلودگی بیشتری در مقایسه با استان ایلام با 21/2 درصد بود. آلودگی برخی از نمونه های علائم دار با ویروس زردی غربی چغندرقند نشان دهنده احتمال آلودگی با سایر ویروسها می باشد. به منظور تعیین آلودگی 3 نمونه (دو و یک نمونه به ترتیب از استان لرستان و ایلام) با واکنش مثبت در آزمون TBIA، انتخاب و به کمک رونوشت برداری برگردان و سپس واکنش زنجیره ای پلی مراز (RT-PCR) و استفاده از نقشه تجدید (restriction analysis)، مورد ارزیابی قرار گرفتند. با استفاده از یک جفت آغازگر عمومی یک قطعه 560 جفت بازی از ناحیه ژن پروتئین پو.ششی BWYV تکثیر گردید. نتایج حاصل از تعیین نقشه تحدید این قطعات به کمک آنزیم های برشی Sma I وRsza Iتأئید کنند آلودگی این نمونه ها با ویروس BWYV بود. در نتیجه واکنش با آنزیم Smai دو قطعه باندازه تقریبی 450 و 110 جفت باز تولید گردید در احلی که آنزیم Rsai برشی در قطعه مورد نظر ایجاد ننمود که با خصوصیات گزارش شده برای ویروس BWYV مطابقت دارد. این واولین گزارش از وقوع آلودگی ویروس زردی غربی چغندرقند از مزارع یونجه کشور می باشد.