ورود
مقالات فارسیISIکنفرانسهاژورنالها

تولید فاکتور ۹ انعقادی انسانی هایپرگلیکوزیله در سلول های جنینی کلیه انسان (HEK۲۹۳) با رویکرد مهندسی گلیکوزیلاسیون

محل انتشار: فصلنامه زیست فناوری، دوره: 11، شماره: 3
سال انتشار: 1399
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 177

فایل این مقاله در 8 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این مقاله:
https://civilica.com/doc/2141218

شناسه ملی سند علمی:

JR_BIOT-11-3_007

تاریخ نمایه سازی: 5 دی 1403

چکیده مقاله:

هایپرگلیکوزیلاسیون فرایندی است که در آن با استفاده از روشهای مهندسی ژنتیک و جهش ­زایی هدفمند یک جایگاه جدید N-گلیکوزیلاسیون (موتیف Asn-Xxx-Ser/Thr) به درون توالی اسیدآمینه ­ای پروتئین نوترکیب وارد می­ شود. در صورت اتصال گلیکن جدید به آسپاراژین موجود در این موتیف، هایپرگلیکوزیلاسیون رخ می­ دهد. این فرایند بویژه در صنعت تولید پروتئین­های دارویی بسیار مورد توجه است. ویژگی­های فارماکوکینتیکی داروهای نوترکیب، ممکن است تحت تاثیر گلیکن اضافه شده قرار ­گرفته و نیمه عمر آنها افزایش یابد. در این تحقیق، بر اساس مطالعات بیوانفورماتیکی، در دامنه گلای فاکتور ۹ انسانی یک جایگاه جدید N-گلیکوزیلاسیون از طریق جهش­ زایی هدفمند مبتنی بر PCR و تبدیل کدون اسیدآمینه آرژینین شماره ۳۷ به آسپاراژین ایجاد شد. توالی رمز کننده فرم جهش یافته فاکتور ۹  انسانی بطور موازی با توالی طبیعی (به عنوان کنترل)، در وکتور بیانی pCEP۴ مجهز به پروموتر ویروس سایتومگالو (CMV)، همسانه سازی شده و بیان آنها در سلول­های HEK۲۹۳ مورد بررسی قرار گرفت. به منظور بررسی رخداد هایپرگلیکوزیلاسیون در نوع جهش یافته، از روش گرادیان SDS-PAGE دارای شیب غلظت آکریل­آمید و به دنبال آن وسترن بلاتینگ استفاده شد که نشان دهنده سنگین­تر بودن محصول جهش یافته نسبت به فرم طبیعی بود. همچنین پس از هضم با استفاده از آنزیم PNGase هر دو محصول طبیعی و جهش یافته وزن مولکولی یکسانی کسب کردند. این نتایج نشان داد که افزایش وزن مولکولی پروتئین جهش یافته ناشی از اضافه شدن گلیکن جدید بوده و تایید کننده رخداد هایپرگلیکوزیلاسیون است.

کلیدواژه ها:

Recombinant human coagulation factor IX ، Hyper-glycosylation ، HEK۲۹۳ cells ، فاکتور ۹ انعقادی انسانی نوترکیب ، هایپرگلیکوزیلاسیون ، سلولهای HEK۲۹۳.

نویسندگان

فهیمه قاسمی

۱. Department of Medical Biotechnology, School of Medicine, Birjand University of Medical Sciences, Birjand, Iran.۲. Cellular and Molecular Research Center, Birjand University of Medical Sciences, Birjand, Iran.

علیرضا زمردی پور

Department of Molecular Medicine, Institute of Medical Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology

علی اصغر کارخانه

Institute of Industrial and Environmental Biotechnology (IIEB), National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology (NIGEB), Tehran, Iran

محمدرضا خرمی زاده

۱. Biosensor Research Center, Endocrinology and Metabolism Molecular-Cellular Sciences Institute, Endocrinology and Metabolism Research Institute (EMRI), Tehran University of Medical Sciences, Tehran,Iran۲. Department of Medical Biotechnology, School of A

مراجع و منابع این مقاله:

لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :
  • White, G.C., Pickens, E.M., Liles, D.K., and Roberts, H.R.(۱۹۹۸) Mammalian ...
  • Kolman, J.A., and Mertens, K.(۲۰۰۰) Surface-loop residue Lys۳۱۶ in blood ...
  • Franchini, M., Capra, F., Tagliaferri, A., Rossetti, G., De Gironcoli, ...
  • Takahashi, I., Kojima, T., Sano, M., Watanabe, T., Kamiya, T., ...
  • Chorba, T.L., Holman, R.C., Clark, M.J., and Evatt, B.L.(۲۰۰۱) Effects ...
  • Franchini, M., Frattini, F., Crestani, S., Sissa, C., and Bonfanti, ...
  • Zhong, D., Smith, K.J., Briktofy, J.J., and Bajaj, S.P.(۱۹۹۴) First ...
  • Geddes, V.A., and MacGillivray, R.T.(۱۹۸۷) The molecular genetics of hemophilia ...
  • Huang, M., Furie, B.C., and Furie, B.(۲۰۰۴) Crystal structure of ...
  • Arruda, V.R., Hagstrom, J.N., Deitch, J., Heiman-Patterson, T., Camire, R.M., ...
  • Jallat, S., Perraud, F., Dalemans, W., Balland, A., Dieterle, A., ...
  • Liu, Y., Nguyen, A., Wolfert, R.L., and Zhuo, S. (۲۰۰۹) ...
  • Sagt, C., Kleizen, B., Verwaal,R., De Jong, M., Muller, W., ...
  • Elliott, S., Chang, D., Delorme, E., Eris, T., and Lorenzini, ...
  • Ghasemi, F., Zomorodipour, A., Karkhane, A.A., and Khorramizadeh, M.R. (۲۰۱۶) ...
  • Eswar, N., Webb, B., Marti-Renom, M.A., Madhusudhan, M., Eramian, D., ...
  • Ahmad, S., Gromiha, M., Fawareh, H., and Sarai, A. (۲۰۰۴) ...
  • Gupta, R. and Brunak, S. (۲۰۰۲) Prediction of glycosylation across ...
  • Haddad‐Mashadrizeh, A., Zomorodipour, A., Izadpanah, M., Sam, M.R., Ataei, F., ...
  • Mathys, L. and Balzarini, J. (۲۰۱۵) Several N-glycans on the ...
  • Croset, A., Delafosse, L., Gaudry, J., Arod, C., Glez, L., ...
  • Flintegaard, T.V., Thygesen, P., Rahbek-Nielsen, H., Levery, S.B., Kristensen, C., ...
  • ۲۳. Ceaglio, N., Etcheverrigaray, M., Kratje, R., and Oggero, M. ...
  • McGinnes, L.W. and T.G. Morrison, (۱۹۹۷) Disulfide bond formation is ...
  • Allen, S., Naim, H.Y., and Bulleid, N.J. (۱۹۹۵) Intracellular Folding ...
  • Ghasemi, F., et al., (۲۰۱۹) Studying the Expression Efficiencies of ...
    • نمایش کامل مراجع