استخراج DNA از بافت بدنی زنبورعسل با روش CTAB بهینه یافته

زنبورعسل با انجام گردهافشانی به گونه های مختلف گیاهی کمک می کند تا تنوع زیستی در اکوسیستم ها حفظ شود. این نقش برجسته باعث مقاومت بیشتر اکوسیستم ها در برابر تغییرات محیطی و نقص های مختلف می شود. از این رو، حفظ زنبورعسل برای حفظ تعادل طبیعی در اکوسیستم ها بسیار حیاتی است و زنبورعسل به عنوان یک منبع غذایی حیاتی برای مجموعه ای از جانوران، نقش بسیار مهمی در تام ین تغذیه آنها ایفا می کند. با توجه به نقش کلیدی زنبورعسل در حفظ محیط زیست و تامین غذای بشر، بایستی صنعت زنبورداری بیشتر مورد عنایت محققان و مسئولان ذیربط قرار بگیرد و تحقیقات ژنتیکی جهت افزایش عملکرد تولیدی زنبورعسل یکی از راهبردهای اصلی در توسعه صنعت زنبورداری به شمار می رود. در این راستا، تحقیقات ژنتیک مولکولی جایگاه ویژهای در توسعه و بهبود عملکرد هر موجود پرورشی دارد. با توجه به اینکه انجام یک فرآیند تحقیقاتی روی ژنوم منوط بر استخراج مناسب و قابل قبول مادهی ژنتیکی است . هدف از تحقیق حاضر ارائه یک روش مناسب استخراج DAN از بافت لاروهای زنبورعسل است . در این پژوهش ، روش استخراج جدید با اعمال تغییرات در پروتکل اصلی (روش (CTAB و بهبود کیفیت DNA استخراجی معرفی می گردد. بدین منظور از تعداد ۲۰۵ نمونه از زنبورهای عسل ایرانی (Apis Meda) نمونه گیری به عمل آمد. نمونه های تهیه شده در داخل الکل ۷۰ درصد قرار داده شدند. سپس نمونه ها توسط هاون چینی در داخل ازت مایع پودر شدند. استخراج DNA به روش CTAB تغییر یافته انجام گرفت . پس از پودرکردن نمونه ها توسط ازت مایع ، استخراج DNA با تغییراتی در روش بهینه یافته CTAB انجام گرفته و کمیت و کیفیت به ترتیب آن توسط دستگاه نانودراپ و ژل آگارز یک درصد ارزیابی شد که نمونه های استخراجی کیفیت بسیارمطلوب تری را نسبت به سایر پروتکل ها نشان داد. استخراج با روش CTAB بهبود یافته انجام و نتا یج استخراج با استفاده از ژل آگارز ۱ درصد و دستگاه نانودراپ ارزیابی شد . همچنین جهت آزمون امکان تکثیر موفق یا انجام صحیح واکنش PCR از DNA استخراجی ، ۴ جایگاه ژنتیکی مربوط به ژنهای TyrR۱، Mrjp۱، Mrjp۲ و هگزامین با جفت پرایمرهای اختصاصی مربوط به هر جایگاه تکثیر شدند. نتایج نشان داد که DNA استخراجی کیفیت بسیار عالی برای انجام کارهای ژنومی دارد. به طوری که تصاویر به دست آمده از DNA استخراجی روی ژلنشان از کیفیت بالای استخراج و عدم شکستگی آن داشت . کمیت استخراجهای صورت گرفته مطلوب بوده و نمونه های مورد بررسی غلظت های بالاتر ۱۵۰ نانوگرم بر میکرولیتر داشتند. همچنین نمونه ها از لحاظ کیفی بر مبنا ی شاخص های نسبت جذبی ۲۶۰ به ۲۸۰ (OD۲۶۰/۲۸۰)، شاخصی برای آلودگی احتمالی مربوط به پروتئین ، و نسبت جذبی ۲۶۰ به ۲۳۰ (OD۲۶۰/۲۳۰)، شاخصی برای آلودگی احتمالی مربوط به فنول، الکل و کربوهیداتها، مورد ارزیابی قرار گرفتند. مطابق انتظار و با استناد به نتایج ژل آگارز، نمونه ها برای هر دو شاخص در دامنه ی مطلوبی قرار داشتند. این نسبت ها برای نسبت جذبی (OD۲۶۰/۲۸۰) در حدود ۸/۱ و برای نسبت جذبی (OD۲۶۰/۲۳۰) در حدود ۲ بودند. این مقادیر بیانگر کیفیت مطلوب برای نمونه های مورد بررسی است . همچنین نتایج تکثیر جایگاههای ژنومی نشان داد که DNA استخراجی قابلیت تکثیر دارد و استخراج به خوبی انجام شده است .

کلیدواژه ها:

زنبورعسل ، گرده افشانی ، استخراج ژنوم ،