بهینه سازی روش استخراجRNA از بافت پوست شاخه درختان خانواده مخروطیان

فرآیند استخراج RNA از بافت­های سخت چوبی و به­طور خاص درختان خانواده مخروطیان به‎دلیل داشتن غلظت­های بالایی از ترکیبات فنولیک، پلی­ساکاریدها، متابولیت­های ثانویه و لیگنین، بسیار مشکل است و تا به‎حال هیچ­گونه کیت تجاری برای این منظور ساخته نشده است. در این مطالعه مشکلات فوق برطرف گردیده و روشی سریع، ساده و اقتصادی برای استخراج RNA از بافت ساقه گونه های Cedrus deodara و Abies grandis که هر دو از خانواده مخروطیان می­باشند، ارائه شده است. نسبت جذب نوری در طول موج های ۲۶۰ به ۲۸۰ و ۲۶۰ به ۲۳۰ نانومتر، به‎ترتیب ۸۸/۱ و ۱/۱ برای گونه  Cedrus deodara و ۸/۱ و ۹/۰ برای گونه Abies grandis به‎دست آمد. تغییرات صورت گرفته در جهت بهینه سازی استخراج RNA نیز شامل استفاده از تیمار پیش گرما روی بافر استخراج، کاهش دور سانتریفیوژ حذف آلودگی DNA و حذف DEPC می باشد. ساخت cDNA با استفاده از RNA استخراج شده با موفقیت انجام و واکنش RT-PCR باندهای مورد انتظار را تولید نمود. لذا به­نظر می­رسد این روش برای استخراج RNA از بافت­های چوبی مناسب است.

کلیدواژه ها:

بافت چوبی ، ترکیبات فنولیک ، درخت نراد ، DEPC