پاسخ گیاه بنفشه Viola Wittrockiana به سرما با استفاده از روش DDRT

گونه دورگ بنفشه Viola wittrockiana تحمل قابل توجهی به دماهای پایین نشان می دهد که باعث شده در سراسر جهان از محبوبیت زیادی برخوردار شود. به منظور مطالعه الگوی بیان ژن در شرایط دماهای پایین از برگهای این گیاه در دمای 25 درجه سانتیگراد به عنوان نمونه شاهد و دماهای 5 ، صفر 5 - و 10 - درجه سانتیگراد نمونه برداری شد.با کمک روش نمایش افتراقی Differential Display or RAP-PCR به بررسی تفاوت بیان ژنها پرداخته شد. استخراج RNA از برگهای بنفشه برای هر پنج تیمار دمایی انجام شد. با کمک آنزیم رونویسی معکوس و با استفاده از سه آغازگر اولیگو (اولیگو dTA ، اولیگو dTC و اولیگو dTG ساخت رشته اول cDNA انجام شد. در مرحله بعد از هشت آغازگر انتخابی با طول 13 نوکلئوتید استفاده گردید. آغازگرهای مورد استفاده شامل HAP25 ، HAP و 32 HAP31 ، HAP30 ، HAP29 ، HAP28 ، HAP27 ، HAP26 بودند که به همراه آغازگرهای اولیگوی مورد استفاده در مرحله ساخت رشته اول cDNA در واکنش RT- PCR به کار رفتند. جداسازی باندها بر روی ژل آگارز 3% انجام گرفت نتایج نشان داد که از میان سه آغازگر اولیگو، آغازگر اولیگو dTC بیشترین تعداد باند را تولید کرد. از میان آغازگرهای انتخابی نیز آغازگر انتخابی HAP30 برای مجموع سه آغازگر اولیگو، بیشترین تعداد باند را ایجاد کرد. از بین تیمارهای مختلف دمائی، بیشترین تنوع باند ها در دمای منفی پنج درجه سانتیگراد مشاهده شد که نشان می دهد ژنهای متفاوتی در این دما بیان می شوندو توالی یکی از نمونه های مرتبط با تنش سرماگزارش و بررسی شد.

کلیدواژه ها:

بنفشه viola wittrockiana ، تنش سرما ، روش نمایش افتراقی ، الگوی بیان ژن