میزان بیان پلی مورفیسم D۲۹۹G و T۳۹۹I ژن TLR۴ در رده سلولی سرطان کولورکتال به روش فلوسایتومتری

زمینه و هدف : گیرنده های شبه Toll (TLRs) به عنوان مهم ترین گیرنده ها در ایمنی ذاتی شناخته شده اند. گیرنده TLR۴ به عنوان گیرنده اصلی در شناسایی لیپوپلی ساکارید (LPS) باکتری های گرم منفی عمل می کند. دو پلی مورفیسم rs۴۹۸۶۷۹۰) D۲۹۹G (SNP و (SNP rs۴۹۸۶۷۹۱) T۳۹۹I در ژن این گیرنده موجب کاهش پاسخ دهی به LPS می شود. این مطالعه به منظور تعیین میزان بیان پلی مورفیسم های مختلف ژن TLR۴ در رده سلولی سرطان کولورکتال HT۲۹ ، HCT۱۱۶ و CaCo۲ به روش فلوسایتومتری انجام شد. روش بررسی : در این مطالعه آزمایشگاهی انتقال پلاسمید حاوی ژن واریته های مختلف شامل Flag-tagged-TLR۴وحشی، Flag-tagged D۲۹۹G و Flag-tagged T۳۹۹I موتان به سلول های HCT۱۱۶ توسط معرف Turbofect صورت گرفت. راندمان انتقال ژن توسط پلاسمید GFP ارزیابی شد. میزان بیان واریته های مختلف TLR۴ در سلول های دریافت کننده ژن ها از طریق فلوسایتومتری بررسی شد. داده ها با استفاده از نرم افزار آماری SPSS-۱۱.۵ و آزمون Chi-Square تجزیه و تحلیل شدند. یافته ها : رده های سلولی HT۲۹ و CaCo۲گیرنده TLR۴ را در سطح پایینی بیان کردند. در حالی که سلول های HCT۱۱۶ قبل از انتقال پلاسمید، ژن TLR۴ را در سطح قابل ردیابی به روش فلوسایتومتری بیان نکردند. راندمان انتقال ژن GFP به داخل سلول های HCT۱۱۶ به وسیله آنالیز میکروسکوپی و فلوسایتومتری حدود ۸۰ درصد اندازه گیری شد. براین اساس میزان بیان TLR۴و پاسخ دهی به LPS در سلول هایی که ژن واریته وحشی TLR۴ را دریافت کردند؛ به طور معنی داری بیشتر از سلول هایی بود که ژن واریته موتان را دریافت کردند (P<۰.۰۵). نتیجه گیری : سطح پایین بیان TLR۴ روی سلول های دارای نوع موتان گیرنده نشان داد که این پلی مورفیسم ها روی بیان گیرنده در سلول های سرطان کولون اثر دارند.

کلیدواژه ها:

TLR۴ gene ، Polymorphism ، LPS ، HCT۱۱۶ cell line ، ژن TLR۴ ، پلی مورفیسم ، LPS ، رده سلولیHCT۱۱۶