بررسی بیان ژن lnT هلیکوباکتر پیلوری در سلول های HDF انسان به روش RT-PCR

چکیده زمینه و هدف: هلیکوباکتر پیلوری، باکتری مارپیچی شکل و گرم منفی است که موجب بیماری­های معده و دوازدهه در انسان می­شود. به دلیل وجود ایراداتی در درمان­های آنتی­بیوتیکی، تلاش­های رو به افزایشی در جهت تولید واکسن موثر برای این عفونت صورت گرفته است. هدف از این تحقیق، ساخت سازواره­ ژنی حامل قطعه ژن lnT و بررسی بیان آن در سلول­های انسانی به روش RT-PCR است.   مواد و روش ها: در این مطالعه آزمایشگاهی، ژن lnT از ژنوم هلیکوباکتر پیلوری به روش واکنش زنجیره­ای پلیمراز (Polymerase Chain Reaction) جدا شد. همسانه سازی محصولات PCR به روش کلون سازی T/A در وکتور T مناسب، انجام شد. سپس ژن lnT در وکتور بیانی یوکاریوتی pEGFP-C۲ ساب­کلون گردید. جهت بررسی بیان ژن lnT، سازواره pEGFP-C۲-lnT به روش الکتروپوریشن به سلول­های فیبروبلاست پوست انسان منتقل و بیان آن به روش RT-PCR بررسی شد. یافته­ها: انجام PCR منجر به تکثیر قطعه ۱۲۹۰ جفت بازی مربوط به ژن lnT گردید. این ژن با موفقیت در وکتور pTZ همسانه سازی شد و نتایج هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد ژن lnT در وکتور بیانی ساب­کلون گردیده و سازواره نهایی pEGFP-C۲-lnT ایجاد شده است. بررسی بیان این ژن به روش RT-PCR، تشکیل باند اختصاصی این ژن را نشان داد. نتیجه­گیری: ژن lnT همسانه سازی شده در وکتور بیانی یوکاریوتی pEGFP-C۲، توان تولید محصول اختصاصی این ژن در سلول­های یوکاریوتی را دارد. لذا به­نظر می رسد این سازواره ژنی، از پتانسیل لازم برای بررسی ایمنی­زایی در مدل حیوانی به عنوان واکسن ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری برخوردار باشد.  واژه های کلیدی: هلیکوباکتر پیلوری،کلونینگ، ژن lnT­، RT-PCR

کلیدواژه ها:

Helicobacter pylori ، Cloning ، lnT gene ، RT-PCR ، هلیکوباکتر پیلوری ، کلونینگ ، ژن lnT­ ، RT-PCR