انتقال و بیان ژن GnRH نوترکیب ماهی در باکتری BL۲۱ E. coli به منظور تولید هورمون نوترکیب

هورمون آزاد کننده گنادوتروپین (GnRH) یک نوروپپتید موثر در تنظیم فرآیند تولیدمثل در مهره داران می باشد. آنالوگ های مختلفی از این هورمون به فرم سنتتیک با نیمه عمرهای مختلف برای تکثیر مصنوعی آبزیان در بازار موجود می باشند. هدف از این تحقیق بررسی بیان GnRH نوترکیب در باکتری  Escherichia coliسویه  BL۲۱به منظور تولید هورمون نوترکیب می باشد. در این تحقیق، توالی DNA مربوط به پپتید GnRH طراحی شده در وکتور بیانی pET۲۸a+ کلون شد. واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) به کمک آغازگرهای اختصاصی صحت کلونینگ را نشان داد. وکتور نوترکیب pET۲۸a+/GnRH به باکتری بیانی E. coli BL۲۱ (DE۳) انتقال داده شد و صحت انتقال با کلونی PCR سنجیده شد و باند ۱۸۶ جفت بازی حاصل از تکثیر ژن بر ژل آگارز مشاهده گردید. سپس برای بررسی بیان، باکتری نوترکیب در محیط Luria Bertani (LB) حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد کشت داده شد و با غلظت یک میلی مولار Isopropyl β-D-۱-thiogalactopyranpside (IPTG) القاء شد و بعد از القاء، باکتری در دو دما و زمان مختلف شامل ۶ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد و ۲۴ ساعت در دمای ۲۰ درجه سانتی گراد قرار گرفت. میزان بیان به کمک الکتروفورز ژل SDS-PAGE تعیین شد. بررسی SDS-PAGE نشان دهنده بیان پپتید بوده و باند هشت کیلودالتونی مربوط به پپتید مورد نظر بر روی ژل قابل مشاهده بود. همچنین میزان بیان پپتید در دمای ۲۰ درجه سانتی گراد بیشتر از دمای ۳۷ درجه سانتی گراد می باشد. با توجه به نتایج بدست آمده از تحقیق حاضر می توان نتیجه گرفت که هورمون GnRH قابلیت تولید در سیستم بیانی پروکاریوتی همانند اشریشیاکلی را دارد و پس از خالص سازی می تواند به عنوان یک همولوگ خاص برای درمان اختلالات تولید مثلی در آبزیان معرفی گردد.

کلیدواژه ها:

GnRH ، E.coli ، Aquatic animals ، Hormonal induction ، GnRH ، اشرشیاکلی ، القای هورمونی ، آبزیان