ایجاد وکتورهای تداخلی یوکاریوتی از pSVM با انتقال ناحیه ی توالی اتصال در ژنوم (attB) به آن

زمینه و هدف: سالیان زیادی است که انواع مختلفی از سلول های تخمدان هامستر چینی (CHO) غالبا برای تولید اکثر محصولات دارویی استفاده می شود. تولید دائمی در این سلول های میزبان، یک چالش بزرگ است. هدف از این مطالعه، همسانه سازی ناحیه ی توالی اتصال در ژنوم باکتری (attB) در وکتور pSVM با استفاده از سیستم نوترکیبی phiC۳۱ برای بقای طولانی وکتور در سلول های CHO بوده است. روش بررسی: در این مطالعه تجربی آزمایشگاهی، یک جایگاه برش آنزیم محدود کننده ی PvuII به عنوان جایگاه کلونینگ توسط نرم افزار CLC در وکتور pSVM انتخاب که برش با این آنزیم منجر به ایجاد دو انتهای صاف در وکتور شد. دو پرایمر اختصاصی برای جداسازی و تکثیر ناحیه ی attB از وکتور pDrBB۲ توسط نرم افزار ۵ Oligo®طراحی شد. ژل الکتروفورز و آنالیز PCR بر روی قطعه تکثیرشده در جهت تایید ساختار آن انجام شد. یافته ها: ناحیه ی attB به طور موفق در داخل وکتور pSVM الحاق شد و توسط ژل الکتروفورز نشان داده شد. در جهت تایید ورود ژن attB در وکتور pSVMواکنش colony PCR از کلنی های نوترکیب انجام شد و صحت کلونینگ با مشاهده ی باند مربوط به ترادف attB انجام گرفت. نتیجه گیری: در این تحقیق، جایگاه attB در پلاسمیدpSVM همسانه سازی گردید. با بهره گیری از این اطلاعات و وجود جایگاه psedo-attP در کروموزوم سلول های CHO، می توان بعد از الحاق ژن اینترفرون انسانی در این پلاسمید، و ورود این پلاسمید و پلاسمید حاوی آنزیم اینتگراز به سلول های CHO برای اولین بار زمینه ی پایداری بیان این پروتئین را در سلول های CHO فراهم کرد.

کلیدواژه ها:

CHO cells ، Eukaryotic genome attachment site ، Site-specific recombination ، recombination ، Construct ، Gel electrophoresis ، سلول های تخمدان هامسترچینی ، ناحیه ی توالی اتصال در ژنوم یوکاریوتی ، نوترکیبی در جایگاه خاص ، وکتورهای تداخلی ، وکتور pSVM