تشخیص سریع آلودگی مزارع مرغ مادر به مایکوپلاسما سینوویه با استفاده از روش ‭PCR ‬و ‭RT- PCR‬

مایکوپلاسما سینوویه از عوامل مهم ایجاد کننده بیماری در ماکیان و بوقلمون است که موجب عفونت دستگاه تنفسی و غشاهای سینوویال می گردد و همه ساله خسارات اقتصادی زیادی به صنعت طیور وارد می سازد. جداسازی و ردیابی دقیق مایکوپلاسما سینوویه در گله های مرغ مادر کمک به جلوگیری از انتشار عامل پاتوژن در سطح گله های گوشتی می نماید. هدف از این تحقیق، بررسی امکان کاربرد روش ‭RT-PCR ‬به منظور ارزیابی حضور آلودگی فعال مایکوپلاسما سینوویه در گله های مرغ مادر بود. به همین منظور تعداد سیزده گله دارای واکنش مثبت سریع سرمی نسبت به مایکوپلاسما سینوویه به عنوان گله های مورد ارزیابی انتخاب گردیدند. نمونه های اخذ شده از گله ها، مشتمل بر سواپ های شکاف کامی-حلقی و نایی بلافاصله بعد از قرار گرفتن در محیط ‭PPLO ‬براث، برای انجام آزمایش به موسسه رازی منتقل گردیدند. بعد از غنی سازی کوتاه مدت اولیه در انکوباتور، بر روی نمونه ها کشت، ‭PCR ‬و ‭RT-PCR ‬صورت پذیرفت. در روش کشت در پاساژ اول، 4 نمونه و در پاساژ پنجم، 6 نمونه بر روی محیط ‭PPLO ‬آگار، پرگنه مایکوپلاسما سینوویه ایجاد کردند. در روش ‭PCR ‬و ‭RT-PCR ‬از پرایمرهای اختصاصی جنس و گونه مایکوپلاسما سینوویه در ناحیه ‮‭16‬‭S rRNA ‬استفاده گردید. نمونه ها پس از راه اندازی روش ‭PCR ‬و ‭RT-PCR ‬با استفاده از سویه استاندارد ‭MS ‬مورد ارزیابی قرار گرفتند. تمامی نمونه ها در روش ‭PCR‬، باند مشخص‭bp‬‮‭161‬ جنس مایکوپلاسما و باند مشخص ‭bp‬‮‭207‬ متعلق به گونه مایکوپلاسما سینوویه را ایجاد نمودند. در روش ‭RT-PCR ‬نیز تنها نمونه های اخذ شده از چهار گله باند مشخص ‭bp‬‮‭270‬ را در ژل الکتروفورز ایجاد نمودند. با توجه به نتایج حاصله، روش کشت توانمندی ردیابی عفونت فعال با مایکوپلاسما سینوویه را دارا می باشد. نتایج مثبت روش کشت وابستگی زیادی به مرحله بیماری عفونی، نحوه و محل اخذ نمونه و شرایط انتقال نمونه(بدون آسیب به حیات باکتری) و اجرای مناسب روش کشت دارد. همچنین روش کشت، وقت گیر و زمانبر بوده و در صورت ایجاد آسیب به حیات باکتری پس از نمونه گیری، امکان ردیابی آن وجود ندارد. روش های دیگر ردیابی عفونت مایکوپلاسمایی در این مطالعه مشتمل بر ‭PCR ‬و ‭RT-PCR‬بود که در مقایسه با روش کشت، با سرعت بیشتری قابل اجرا می باشند. روش ‭PCR ‬دارای توانمندی در ردیابی ژنوم باکتری زنده یا مرده در گلههای مبتلا است، در حالی که روش ‭RT-PCR ‬صرفا توانمندی ردیابی حضور عامل مایکوپلاسمایی فعال یا تازه غیرفعال شده در محل هایی از اخذ نمونه را دارا است که نمونه ها به شکل مناسبی اخذ و در بازه زمانی کوتاهی به آزمایشگاه انتقال داده شوند. به هر حال، ‭RT-PCR ‬روش قابل اعتمادی در تشخیص آلودگی پرندگان با باکتری زنده یا تازه غیر فعال شده مایکوپلاسما سینوویه است. واژه های کلیدی: مایکوپلاسما سینوویه ، مرغ مادر ،‭PCR ‬،‭PCR ‬، طیور