کلونینگ و بیان پروتیین غشایی P48 مایکوپلاسما آگالاکتیه درE. coli و ارزیابی آن به منظور تهیه کیت الایزا

بیماری اگالاکسی مسری سالانه تعداد زیادی از گلههای گوسفند و بز را در ایران و سراسر جهان درگیر می نماید.باتوجه به عمومی بودن علایم،تشخیص قطعی بیماری باید با شناسایی آزمایشگاهی عامل آن صورت گیرد. شناسایی مایکوپلاسماآگالاکتیهدرایران با روش کشت وPCRانجام می شودکه زمان بروپرهزینه است، به همین دلیل یک روش تشخیصی آزمایشگاهی ساده، سریع و ارزان مورد نیاز می باشد. آزمایشا لایزا از خصوصیات مناسبی برای انجام اینکار برخوردار است. فقدان دیواره سلولی وکوچک مایکوپلاسماها سبب محدودیت درتعدادآنتی ژن های آنها شده است. علاوه بر این، رخداد تنوع آنتی ژنی درپروتیینهای آنها، یافتن پروتیین مناسبراجهت آزمایش های تشخیصی بادشواری روبروکرده است. پروتیینP48مایکوپلاسماآگالاکتیهبه عنوان یک کاندیدای مناسب برای استفاده درآزمایش های سرمی مطرح است، اماتاکنون تنوع آنتی ژنی آن مورد ارزیابی قرارنگرفته است. لذاجهت اطمینان ازپایداری آنتی ژنی آن درایران، تعیین توالی ژن در جدایههای ایرانی انجام شد.سپس طراحی،بهینه سازی،ساخت ژن و کلونینگ آن دروکتورpET28a(+)انجام گرفت و پس از ترانسفورماسیون در باکتری E. coli BL21نسبت بهینه سازی بیان وتخلیص پروتیین اقدام شد. به منظورارزیابی عملکرد پروتیین درآزمایش الایزا، ایمن سازی خرگوش برای تولید سرم مثبت ومنفی انجام شد وباآزمون صفحه متقاطع الایزا مقادیربهینه متغیرهاتعیین گردید. نتایج نشان دادگرچه این ژن درمناطق مختلف جغرافیایی دارای تنوع میباشدکه ممکن است باایجادتغییردراپی توپ های این آنتی ژن موجبات تنوع آنتی ژنی رافراهم آورد، اماپروتیین تولیدی ژن درجدایه های ایرانی مشابه و پایدارهستند. بنابراین پروتیینP48 برای استفاده در آزمایش های تشخیصی در سویه های ایران مناسب می باشد. باتوجه به نتایج این تحقیق باکتری اشرشیاکلی به عنوان یک میزبان کم هزینه توانایی تولید مقادیرمناسب پروتیینP48 را به صورت محلول را دارد وخالص سازی پروتیین نوترکیب بوسیله رزین نیکل نیزکارایی رضایت بخشی داشت. نظر به اینکه کیت الایزای نوترکیبP48توانایی لازم را برای توسعه به یک روش سریع، ساده، دقیق وارزان قیمت و با پایداری مناسب رادارد می توان با تولید تجاری از آن در غربالگری و تعیین تیتر ناشی از واکسیناسیون گله استفاده نمود.آگالاکتیه،P48 ، پروتیین نوترکیب، الایزا