تولید آزمایشگاهی ‭100 bp DNA ‬مارکر الکتروفرز

سایز مارکرها از قطعات با اندازه مولکولی مشخص تشکیل می گردند که در جریان ژل الکتروفورز در مجاورت قطعه یا قطعات با اندازه نامعلوم رانده می شوند تا امکان تخمین اندازه این قطعات را فراهم نمایند. نمونه های تجاری سایز مارکرها معمولا بر اساس هضم آنزیمی ژنوم فاژ لامبدا تهیه می شوند و علیرغم استفاده گسترده در آزمایشگاه های مولکولار بیولوژی عمدتا از قیمت قابل ملاحظه ای برخوردار می باشند. در مطالعه حاضر یک روش نسبتا ساده و کم هزینه بر مبنای ‭PCR ‬جهت تولید سایز مارکر با قطعات ‮‭100‬ زوج باز شرح داده شده است. بر مبنای ژنوم سویه ‭Bacillus anthracis Sterne ‬‮‭34‬F2، ده زوج پرایمر جهت تکثیر ده قطعه ژنتیکی به طول دقیقا ،‮‭200 100‬ ، ‮‭300‬ ... و ‮‭1000‬ زوج باز طراحی گردید. اجزا و شرایط ‭PCR ‬به گونه ای تنظیم گردیدند که هر ‮‭10‬ واکنش ‭PCR ‬به صورت همزمان و بر اساس یک پروتکل اجرا گردیدند. محصولات ده گانه ‭PCR ‬جهت اطمینان از اندازه تعیین توالی نوکلیوتید گردیدند. مقادیر مختلف از محصولات ‭PCR ‬تهیه و پس از خالص سازی تجمیع گردیدند. کمیت های تلفیقی مختلف اجزا سایز مارکر ابداعی در مقایسه با نمونه های تجاری مشابه بررسی گردید. یافته های مقدماتی کیفیت نسبتا مطلوب این محصول را با توجه به هزینه اندک و روش ساده تهیه آن نشان دادند اما تعیین میزان پایداری و تثبیت مقادیر کمی و کیفی اجزا این سایز مارکر احتیاج به مطالعه و کار بیشتر خواهد داشت. کلمات کلیدی‭: DNA size marker - PCR - Loading buffer - Electrophoresis - ‬‮‭100‬ ‭bp