جداسازی و شناسایی باکتری های اسید لاکتیک در برخی سیلاژ های ذرت کشور

یکی از مهمصترین روشصهای نگهداری علوفه به روش سیلاژ میصباشد که در آن میزان ‭pH ‬علوفه سیلو شده (ذرت-یونجه و ..) طی فرایند تخمیر بیصهوازی به سرعت کم شده و در نتیجه امکان فساد و رشد پاتوژنصها به حداقل میصرسد. یکی از مکملصصهای بیولوژیک و مهم مورد استفاده در افزایش کیفیت و ماندگاری سیلاژ علوفهصهای مختلف، فرمولاسیون های باکتریصهای اسید لاکتیک موثر در فرایند سیلاژ می باشد که متاسفانه تاکنون بطور کامل از خارج از کشور وارد می شود. در این راستا طرحی تحقیقاتی با عنوان جداسازی، شناسایی و بهینهصسازی تولید سوشصهای مناسب میکروبی در تخمیر طبیعی سیلوی ذرت با چهار پروژه طراحی شد. در پروژه حاضر که اولین پروژه طرح مذکور می باشد، جداسازی، شناسایی و بررسی خصوصیات سویه های لاکتوباسیل موثر در فرایند سیلاز صورت گرفت. بدین منظور، ابتدا از مزارع ذرت از سه منطقه متفاوت آب وهوایی کشور شامل اصفهان ،گرگان و قزوین، ذرت علوفه ای برداشت شده و در همان محل توسط دستگاه چاپر خرد شده و در قالب طرح آماری در مینی سیلو های آزمایشگاهی در محل پژوهشکده سیلو شدند. در طی روزهای مختلف انجام فرایند سیلو (،0 ،2 ،6 ،‮‭14‬ ،‮‭21‬ ،‮‭32‬ ،‮‭365 90‬) از سیلوها نمونه برداری شده و پس از کشت عصاره حاصل از شستشوی نمونه سیلو در شرایط میکروایروفیلیک و هوازی در محیط کشتصهای انتخابی ‭MRS ‬با استفاده از روش سری رقت تک کلنیصهای مورد نظر انتخاب شدند. از تعداد حدود ‮‭450‬ تک کلونی بدست آمده حدود ‮‭200‬ جدایه باسیل گرم مثبت و کاتالاز منفی انتخاب شدند. در مرحله دوم کار با توجه به خصوصیات موثر در کیفیت سیلاژ آزمایشات بیوشیمیایی شامل تست مقاومت به اسید در دامنه اسیدیته ‮‭2/5-9‬ انجام شد و برخی از جدایهصها قابلیت رشد در اسیدیته 3 تا 8 را دارا بودند. در آزمایش بعدی تست مقاومت به نمک در غلظتصهای 4 تا ‮‭10‬ درصد انجام شد و اکثریت جدایهصها تا میزان 8 درصد نمک را تحمل می کردند. در ادامه اثرات ضد میکروبی سویهصهای منتخب بر علیه قارچ ‭Fusarium verticillioides ‬عامل ری زار ل ذرت در شرایط آزمایشگاهی و مزرعه ای مورد ارزیابی قرار گرفت که برخی سویه ها در شرایط آزمایشگاهی (بازدارندگی تا ‮‭2/6‬ سانتی متر قطر کلنی) و مزرعهصای (تا حدود ‮‭40‬ درصد) اثرات معنیصداری بر کاهش میزان بیماری و حفظ عملکرد ذرت نشان دادند. شناسایی مولکولی سویه های منتخب بر اساس توالی ژن ‮‭16‬‭SrDNA ‬نشان داد که سویهصها متعلق به گونهصهای ‭Lactibacillus fermentum‬، ‭L. plantarum‬، ‭L. pentosus‬، ‭L. paralimentaris‬، ‭L. plantarum‬، ‭L. buchneri ‬میصباشند. علاوه بر این سویهصهای منتخب برای ارزیابی در سیلوهای آزمایشگاهی مورد استفاده قرار گرفتند که در حال حاضر آزمایشات ارزیابی کیفی سیلوهای تیمار شده با سویهصصهای منتخب در دست بررسی می باشد. کلمات کلیدی: جداسازی، لاکتوباسیل بومی، سیلاژ ذرت، ‮‭16‬‭SrDNA ‬و ‭Fusarium verticillioides