جهش زایی هدفمند در موقعیت های R14T و R120A آنزیم فیتاز یرسینیا اینترمدیا به منظور پایداری انزیم

فیتات و مضرات آن:فیتات میواینوزیتول هگزاکیزفسفات ، نمک فیتیک اسید است و در تمام دانه ها و احتماال تمام سلولهای گیاهی توزیع میشود تلاشهای بزرگی برای کاهش میزان فیتات در غذاها با فرایندهای مختلف و یا با اضافه کردن آنزیم های خارجی صورت گرفته است متاسفانه فیتات در روده ی تک معده ای ها هیدرولیز نمیشودو نیاز به افزودن فسفات خارجی دارند تا از کمبود فسفرجلوگیری شودکه این امر نه تنها باعث افزایش هزینه ها میشودکه باعث ایجاد آلودگی جدی محیط میشود.فیتات موجب شلاته شدن یونهای دو ظرفیتی مثل Mn2+، Mg2+، CU2+، Fe2+، Fe3+، Zn2+، Cu2+میشودهمچنین با برخی پروتیئنها کمپلکس قوی ای را تشکیل میدهد همچنین میتواند با نشاسته به طور مستقیم از طریق پیوندهای هیدروژنی یا به طور غیرمستقیم از طریق پروتئین مرتبط با نشاسته ارتباط برقرار کند. فیتات به همراه سایرمواد مغذی)کمپلکس لیپیدو مشتقات آن(لیپوفیتینها را تشکیل میدهدفیتاز و استفاده از آن:. برای افزایش دسترسی زیستی موادمغذی از آنزیم های فیتاز استفاده میکنند. فیتازها گروه ویژه ای از فسفاتازها یا فسفریک مونواستر هیدرولازها هستند که قادر به هیدرولیز فیتات میباشند و حداقل یک گروه فسفات را از این ماده آزاد می نماینددمای بهینه اکثر فیتازها در حدود60-44 درجه سانتیگراد است.. جهش زایی هدفمند به روش : quickchangeاز این روش جهت ایجاد جهش نقطه ای ، تغییر اسیدآمینه ها ، حذف یا جایگزینی یک یا چند اسیدآمینه استفاده میکنند. این روش جهش زایی به یک پلیمراز قوی و دستگاه ترموسایکلر احتیاج دارد.کارایی باالی پلیمراز و تعداد کم چرخه های حرارتی همگی به راندمان باالی جهش و کاهش پتانسیل تولید جهش های تصادفی در طول واکنش کمک می کند.هدف ازاین مطالعه جهش زایی هدفمند به روش Quickchange™در آنزیم فیتاز از گونه یرسینیا اینترمدیا درموقعیتهای A120R و T41R به منظور افزایش پایداری دمایی بود.