جداسازی و همسانه سازی ژن تاکسوئید 14B هیدروکسیلاز از سلول های گیاه سرخدار گونه Taxus baccata

ترکیبات ثانویه گیاهان از هزاران سال پیش مورد توجه انسان بوده و به عنوان یکی از مهمترین منابع دارویی کاربرد داشتهاند. تنوع متابولیتهای گیاهی، ناشی از عملکرد آنزیمهای سیتوکروم (CYP ) P450 میباشد که یکی از بزرگترینخانواده های ژنی در ژنومهای گیاهی هستند و در این میان نقش ویژه ای در تامین داروهای ضد سرطانی ایفا میکنند. پاکلی تاکسل از مهمترین داروهای ضد سرطان است و اولین بار از گیاه سرخدار (Taxus sp.) جدا شده است. آنزیم تاکسوئید 14 هیدروکسیلاز (14 2+) یکی از آنزیمهای شناخته شده در مسیر بیوسنتزی پاکلی تاکسل گیاه Taxus sp. میباشد. به منظور شناسایی ژن تاکسوئید 14 هیدروکسیلاز از گونه Taxus baccata گیاه سرخدار، طول کامل CDS ژن 14βOH با استفاده از نرمافزار CodonCode Aligner 6.0.1 بر اساس دادههای حاصل از پایگاه SRA قابل دسترسی از NCBI پیشبینی شد. طراحی آغازگرها با استفاده از نرمافزار Oligo 7 انجام و به کمک primer-BLAST قابل دسترس از NCBI اختصاصیت آنها تاییدگردید. استخراج RNA از سلولهای T. baccata انجام و ساخت cDNA صورت پذیرفت. واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR) با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن 14 2+ و آنزیم MaxTaq انجام گرفت. به منظور جداسازی ژن 14βOH، همسانه سازی این ژن در حامل تجاری pTZ57R/T صورت گرفت. نتایج تحقیق حاضر منجر به شناسایی و جداسازی قطعه ای به طول bp 1530 و پروتئینی با 510 اسیدآمینه گردید. هم ردیفی چندگانه ژن 14βOH در سه گونه T. cuspidata، T. x media و T. baccata، % 99 همسانی بین T. baccata و T. cuspidata و % 98 همسانی بین T. baccata و T. x media نشان داد. نتایج حاصل از هم ردیفی پروتئین ژن 14βOH گونه 98 T. baccata %، همسانی با پروتئین Taxane 14b-hydroxylase گونه T. cuspidata نشان داد.

کلیدواژه ها:

Taxus baccata ، پیشبینی توالی ژنی ، همسانهسازی ، سیتوکروم P450 هیدروکسیلاز ، ژن تاکسوئید 14هیدروکسیلاز