بهینه سازی کدونی و مقایسه ی بیان فاکتور رشد عصبی بتا انسانی (β-NGF) بصورت نوترکیب در میزبان های باکتریایی( BL21(DE3 و BL21(DE3)pLysS

فاکتور رشد عصبی بتا (β-NGF) برای اولین بار بدلیل نقش حیاتی اش در رشد و بقای سلول های عصبی مورد مطالعه قرار گرفت. این پروتئین که به خانواده ی نوروتروفین ها تعلق دارد در درمان بیماری های تخریب عصبی نظیر آلزایمر دارای نقش قابل ملاحظه ای می باشد. بدین منظور، β-NGF انسانی نوترکیب برای اولین بار در ایران در دو سویه ی متفاوت باکتری E.coli بیان شد. از آنجاییکه β-NGF در ساختار فعال و عملکردی خود دارای سه پیوند دی سولفیدی است، محیط احیا کننده ی سیتوپلاسم E.coli برای بیان آن مناسب نمی باشد. بنابراین، محیط اکسید کننده ی پری پلاسم جهت تولید β-NGF همراه با تاخوردگی صحیح مورد توجه قرار گرفت. در این تحقیق، cDNA β-NGFانسانی بدست آمده از بانک اطلاعاتی NCBI پس از بهینه سازی کدونی و ساب کلونینگ در وکتور pET39b(+)، حاوی ژن دی سولفید ایزومراز A، به روش ترنسفورماسیون (شوک حرارتی) به سویه های BL21(DE3)pLysS و BL21(DE3) انتقال یافت. بیان همزمان با استفاده از القای پروموتر با غلظت 1 میلی مولار IPTG صورت گرفت. سپس، محتوای پروتئینی استخراج شده از دو سویه ی مذکور با استفاده از تکنیک های SDS-PAGE و دات بلات با یکدیگر مقایسه گردید. نتایج نشان دهنده بیان، بویژه در سویه باکتریایی BL21(DE3) می باشد.

کلیدواژه ها:

فاکتور رشد عصبی ، بیان پری پلاسمی ، پروتئین نوترکیب ، اشرشیا کلی