بررسی میزان ترشح خارج سلولی پپتید ضد سرطان VEGF111b در سلول های انسانی HEK-293

سابقه و هدف VEGF111b یک ایزوفرم جدید از فاکتورهای رشد اندوتلیال عروقی (VEGF) است که اخیرا به عنوان یک دارویضد سرطان مطرح شده است. هدف مطالعه حاضر بررسی میزان ترشح این پروتیین از دیواره سلولهای HEK293 به منظور تولید تجاری این فاکتور نوترکیب است. مواد و روش ها: توالی VEGF111b توسط نرم افزار OLIGO و اطلاعات ژن بانک NCBI طراحی و داخل وکتور pBUD.cE4.1 کلون شد. وکتور نوترکیب pBUD.VEGF111b با استفاده از کیت لیپوفکتامین به داخل سلول های HEK293 ترانسفکت شد. تولید 48VEGF111b ساعت بعد از ترانسفکشن در عصاره لیز سلولی توسط وسترن بلاتینگ و آنتی بادی Human anti-VEGF بررسی شد. میزان ترشح VEGF111b در عصاره لیز سلولی و محیط کشت سلولی به روش ELISA اندازه گیری گردید. نتایج: کلونیتگ صحیح قطعه VEGF111b در وکتور pBUD.cE4.1 توسط هضم آنزیمی و ژل الکتروفورز تایید شد. مشاهده باند شارپ 12 کیلودالتن در نتایج وسترن بلات عصاره لیز سلولی نشانگر تولید پپتید نوترکیب VEGF111b در سلول های HEK293 بود. نتایج الایزا در جذب نوری 450 نانومتر برای VEGF111b در محیط کشت سلولی و عصاره لیز سلولی به ترتیب برابر با 2/81±19/2 pg/ml و pg.ml 7/42±32/87 بود. و در نمونه های کنترل منفی بیان VEGF-111b مشاهده نشد. تیجه گیری: یافته های این مطالعه نشانگر قابلیت بالای انتقال و ترشح VEGF111b از دیواره سلول های HEK293 به محیط کشت سلولی بدون شکستگی و هضم پروتیولیتیکی است. به نظر می رسد تولید تجاری این پپتید دارویی و تخلیص از محیط کشت سلولی HEK293 با بازدهی بالا امکان پذیر باشد.ترانسفکت شد. تولید

کلیدواژه ها:

فاکتور رشد اندوتلیال عروقی A ، HEK ترشح ، HEK293