تخلیص هورمون hCG از ادرار زنان باردار و جداسازی زیرواحدهای آن

سابقه و هدف: هورمون hCG از گلیکوپروتیین های مهم دوران بارداری جهت حفظ جنین است که تقریبا 30 درصد وزن مولکولی اینهورمون را قند تشکیل میدهد. امروزه از این هورمون در درمان و همچنین ساخت واکسن های ضد بارداری استفاده می شود. در تحقیقحاضر سعی در افرایش میزان خلوص و کوتاه کردن مسیر تخلیص این هورمون است.مواد و روشها: جهت تخلیص هورمون hCG از نمونه ادرار زنان باردار دو تا سه ماهه استفاده شد. نمونه جمع آوری شده توسط بنزوات سدیم، اسید استیک و استون رسوب دهی و تغلیظ گردید. با عبور نمونه تغلیظ شده از ستون کانکاناوالین Con-A)A) و جدا کننده های دی گلوکز و دی مانوز، hCG تخلیص گردید. با عبور نمونه hCG تخلیص شده از ستون DEAE-Sepharose 4B، زیرواحدهای آلفا و بتای هورمون جداسازی گردید. خلوص نمونه ها به وسیله SDS-PAGE و صحت آنها با روش الایزا و ایمونوبلایینگ بررسی شد. نتایج: نمونه تغلیظ شده به دست آمده از ادرار و نمونه hCG تخلیص شده از ستون کانکاناوالین A، با استاندارد hCG از شرکت ارگانون از نظر وزن مولکولی و میزان خلوص با روش SDS-PAGE و رنگ آمیزی نیترات نقره مقایسه شدند. نمونه تغلیظ شده شبیهنمونه استاندارد و دارای تعدادی باند اضافی بود که باندهای اضافی بعد از تخلیص hCG حذف گردید. تایید هورمون hCG و زیرواحدهای آن با استفاده از آنتی بادی های مونوکلونال ضد زنجیره α و β به روش الایزا و وسترن بلات انجام گرفت. نتیجهگیری: استفاده از قند دیگلوکز قبل از دیمانوز توانست باعث جداسازی hCG از سایر قطعات hCG و گلیکوپروتیین ها شود.به روش الایزا و وسترن بلات انجام گرفت

کلیدواژه ها:

کوریونیک گنادوتروپین انسانی ، خالص سازی ، کروماتوگرافی