بررسی وجود توکسین در عصاره فیلتر شده کشت قارچ Verticillium alfalfae و نقش آن در بروز علائم بیماری پژمردگی ورتیسیلیومی یونجه

بیماری پژمردگی ورتیسیلیومی یونجه یکی از بیماریهای مهم این محصول در دنیا است که توسط قارچ خاکزی Vetrticillium alfalfaeایجاد میشود. در این تحقیق عصاره فیلتر شده قارچ V. alfalfa در محیط کشت مایع سیب زمینی- دکستروز (PDB) تهیه و اثر آن روی بروز علائم بیماری پژمردگی ورتیسیلیومی یونجه موردبررسی قرار گرفت. ظروف ارلن حاوی محیط کشت مایع سیب زمینی-دکستروز با 5 بلوک به قطر 5 میلیمتر از حاشیه در حال رشد کشت قارچ V. alfalfae تلقیح و روی شیکر گردان با سرعت 99 دور در دقیقه در شرایط تاریکی و دمای 24 درجه سلسیوس به مدت دو هفته قرار داده شد. محیطهای کشت حاوی قارچ V. alfalfae در شرایط استریل و تحت خلا با گذراندن از یک سری فیلتر شامل سه عدد فیلتر که به ترتیب اندازه روزنه ها کوچک میشد و قطر روزنه های آخرین فیلتر 0/2 میکرومتر بود، فیلتر شدند. تیمارهای شاهد شامل آب معمولی ( آب شیر لولهکشی) و PDB اتوکلاو شده که به همان روش روی شیکر تکان داده و فیلتر شده بودند. 10 ساقه بریده شده از بوته های 10 هفته ای یونجه (رقم همدانی) به ازای هر تیمار، به صورت ایستاده درون ظروف ارلن حاوی 100 میلی لیتر عصاره فیلتر شده قارچ/ آب معمولی ( آب شیر لولهکشی) اتوکلاو شده (1:1)، محیط کشت مایع PDBفیلتر شده/آب معمولی اتوکلاو شده (1:1) ، یا آب معمولی اتوکلاو شده قرار داده شدند. آزمایش در چهار تکرار و سه تیمار در قالب طرح کاملا تصادفی انجام شد. پس از 24 ساعت همه محلولها با 100 میلی لیتر آب معمولی جایگزین و به مدت هفت روز در اتاقک رشد و دمای 25 درجه سلسیوس و دوره روشنایی 16 ساعته نگهداری شدند. کلروز به شکل V در نوک برگچه های ساقه های بریده شده یونجه پس از جذب عصاره فیلتر شده قارچ V. alfalfae شروع شد. برگها ابتدا تغییر رنگ داده، سپس مناطق نکروز مایل به صورتی در نوک برگچه ها ظاهر شد. تیمارهای شاهد فاقد علائم فوق بودند. علائم اولیه پس از 48 ساعت ظاهر شد. هیچیک از تیمارهای شاهد تا 7 روز علائم فوق را نشان ندادند.