جداسازی و شناسایی Brenneria alni همراه با بیماری شانکر درختان توسکای ییلاقی در ایران

جنس توسکا با 20 گونه یکی از منابع مهم تولید چوب در نیمکره شمالی است. توسکای ییلاقی (Alnus subcordata ) علاوه بر اهمیت اقتصادی فراوان، نقش اکولوژیکی منحصربه فردی در بازسازی طبیعی جنگلهای تخریب یافته هیرکانی دارد. در بازدیدهای انجامشده از برخی مناطق استان مازندران در تابستان 97، علائم بیماری شانکر تنه به همراه ترشح شیرابه در بعضی از درختان توسکای ییلاقی مشاهده شد. به منظور بررسی عامل بیماری، قسمتهای آلوده به آزمایشگاه منتقل و با آب معمولی شسته شده و پس از ضدعفونی با الکل 70 درصد در پتری دیش حاوی آب مقطر سترون به قطعات کوچک خرد گردیدند. پس از گذشت 25 دقیقه قطراتی از سوسپانسیون حاصله بر روی محیط کشت آگار غذایی حاوی یک درصد سوکروز (NSA) و ائوزین متیلن بلو آگار اصلاحشده +EMB)گلیسرول) مخطط گردیده و تشتکهای کشت شده و در دمای 26-28 درجه سلسیوس نگهداری شدند. پس از 4 تا 5 روز پر گنه های رشدیافته سبز متالیک روی محیط EMB با انتخاب تک پرگنه خالصسازی شده و مورد شناسایی قرار گرفتند. شناسایی جدایه ها با استفاده از آزمونهای فیزیولوژیکی و بیوشیمیایی از قبیل واکنش گرم، اکسیداز، تولید و یا عدم تولید رنگ فلورسنت روی محیط % .LQJ V، رشد هوازی و بی هوازی، واکنش فوق حساسیت در برگ شمعدانی، فعالیت پکتولیتیکی روی ورقه های سیب زمینی، هیدرولیز ژلاتین، توئین 80 و نشاسته، فعالیت لستینازی و احیای نیترات صورت گرفت و جدایه ها بیشترین شباهت را به اعضای خانواده Enterobacteriaceae و بهویژه جنس Brenneria داشتند. شناسایی مولکولی با تکثیر ژن 16srRNAبا آغازگرهای عمومی و تعیین توالی بخشی از این ژن صورت گرفت. جستجو با برنامه بلاست و واکاوی فیلوژنتیکی نشان داد که توالیهای جدایه موردبررسی تشابه 99 درصدی با توالی سویه B. alni (Bal-1) موجود در بانک ژن دارد. با توجه به اطلاعات موجود این اولین گزارش از همراهی باکتری B.alni با بیماری شانکر درختان توسکای ییلاقی در ایران است.