تشخیص دقیق بروسلا در سرم با استفاده از روش Nested PCR

زمینه و اهداف: بروسلاها باکتری های گرم منفی درون سلولی هستند که قادر به ایجاد عفونت در بسیاری از گونه های حیوانی و انسان می باشند. علایم کلینیکی بروسلوز در انسان بسیار متنوع بوده و اغلب غیر اختصاصی است، لذا تشخیص این بیماری نیازمند تایید سریع و دقیق می باشد. از آنجا که استفاده از سرم بجای خون از مزایای متعددی در روش های تکثیر اسیدهای نوکلییک برخوردار است، مطالعه حاضر به طراحی یک واکنش PCR ستاپ شده به منظور تشخیص آزمایشگاهی سریع و اختصاصی بروسلوز در نمونه های سرم انسانی می پردازد.روش بررسی: DNA ی نمونه ها به وسیله کیت DNP استخراج گردید. نمونه DNA از 100 میکرولیتر نمونه سرم10 فرد مبتلا به بیماری حاد بروسلوز، با استفاده از کیت فوق تهیه گردید. پس از ستاپ کردن راند اول و دوم تست PCR ، حساسیت و اختصاصیت آن مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس تمامی نمونه ها به وسیله تست PCR ستاپ شده مورد بررسی قرار گرفتند.یافته ها: یک قطعه 223 جفت بازی ثابت، از ژن مسیول سنتز یک پروتیین ایمونوژنیک غشایی (BCSP31)با وزن ملکولی 31 کیلو دالتون از باکتری بروسلا آبورتوس که ویژه جنس بروسلا می باشد و در تمام واریته های بیولوژیک آن موجود ا ست در کلیه نمونه های سرمی با موفقیت تکثیر شد.نتیجه گیری: تکثیر مجدد محصولات واکنش اول PCR بمنظور تایید و تکثیر بیشتر قطعات بدست آمده، منجر به پیدایش الگوی باندینگ قویتر و با حساسیت و ویژگی بالاتری می گردد، که از آن می توان بعنوان یک روش مفید در تشخیص آزمایشگاهی بروسلوز استفاده نمود.

کلیدواژه ها:

بروسلا ، بروسلوز ، BCSP31 ، Nested PCR