کلونینگ و بیان فیوژن ژن اپسیلون و آلفا کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ D و کلستریدیوم سپتیکوم در E.coli

کلستریدیوم پرفرینجنز یک باکتری بیماریزا، بی هوازی و اسپورزا می باشد که مسیول بیماری های شدیدی در انسان و دام می باشد. توکسین اپسیلون توکسین اصلی کشنده ای است که توسط کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ B و D تولید شده و مسیول بیماری کشنده انتروتوکسمی در دام است. توکسین کشنده آلفا کلستریدیوم سپتیکوم باعث بیماری جدی گاز گانگرن می شود. هدف کلونینگ و بیان فیوژن ژن اپسیلون و آلفا کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ D و کلستریدیوم سپتیکوم در E.coli است. در پژوهش حاضر از یک ساختار جدید کایمریک شامل ژن توکسین اپسیلون کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ D و ژن توکسین آلفا کلستریدیوم سپتیکوم که توسط یک لینکر کوچک به هم متصل شده اند استفاده گردید. فیوژن ژن حاصل در وکتور pJET1.2/blunt وارد ودر سلول مستعد E. coli/TOP10 کلون گردید. پلاسمید نوترکیب ازباکتری E. coli/TOP10/pJETεα استخراج و با استفاده از روش های مختلفی از جمله PCR‐colony، آنالیز هضم آنزیمی و تعیین توالی ارزیابی شد. پس از برش آنزیمی، فیوژن ژن از پلاسمید استخراج شد و در وکتور بیانی pT22b وارد و ساب کلون گردید. سپس وکتور نوترکیب pET22bεα در E. coli/Rosetta بیان شد، بیان پروتیین با استفاده از SDS‐PAGE و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. با توجه به نتایج E. coli/Rosseta و وکتور pET22b برای بیان فیوژن پروتیین مذکور مناسب می باشد. و این فیوژن پروتیین یک کاندیدای بالقوه مطالعات ایمونولوژیکی و تولید واکسن نوترکیب است.

کلیدواژه ها:

کلستریدیوم پرفرینجنز ، کلستریدیوم سپتیکوم ، توکسین اپسیلون ، توکسین آلفا ، فیوژن ژن