کلونینگ ژن انتروتوکسین کلستریدیوم پرفرینجنز در باکتری E.coli و بررسی ویژگی های مولکولی آن

باکتری کلستریدیوم پرفرینجنز (C. Perfringens) یک باسیل گرم مثبت بی هوازی غیرمتحرک ودارای کپسول به طول 2تا 4 میکرون و عرض 0/5 تا 1/5 میکرون است. باکتری C. Perfringens سبب ایجاد طیف وسیعی از بیماری هایی شامل مسمومیت غذایی، گانگرن گازی، انتریت نکروزی، عفونت های معدی- روده ای با منشاء غیرخوراکی در انسان و انتروتوکسمی، قلوه نرمی و عفونت های سیستم گوارشی در دام بوده که می تواند به سرعت منجر به مرگ شود. 17 نوع اگزوتوکسین توسط باکتری C. perfringens تولید می شود که 4 توکسین اصلی آن؛ آلفا، بتا، اپسیلون و یوتا می باشد و توکسین های فرعی به نام های سیگما، تتا، کاپا، لامبدا، مو، نو، نوآمیداز و انتروتوکسین می باشد. عامل بسیاری از مسمومیت های غذاییاین باکتری, انتروتوکسین کلستریدیوم پرفرینجنز (Clostridium perfringens entrotoxin (CPE) است که در مسمومیت های غذایی و بیماری های گوارشی نقش دارد. در پژوهش حاضر باکتری فریزدرای شده تیپ D و C از آمپول برداشت و جهت کشت به لوله ولکام حاوی محیط BHI منتقل و به مدت 18-12 ساعت در جار بی هوازی در 37˚C انکوبه شد. DNA ژنومی با روش فنول کلروفرم و پلاسمید با استفاده از کیت تخلیص پلاسمید, استخراج گردید. توالی رمز کننده ژن انتروتوکسین برای طراحی پرایمرهای اختصاصی جهت انجام PCR از GeneBank به دست آمد. ژن حاصل در وکتور pTG19-T لایگیت و محصول لایگیشن به سویه TOP10 باکتری E.coli ترانسفورم گردید و کلونهای نوترکیب روی محیط حاوی آنتی بیوتیک آمپی سیلین انتخاب شد. پلاسمید حاوی ژن نوترکیب استخراج و توالی یابی گردید. نتیجه توالی یابی با توالی موجود مطابقت داشت. این اولین گزارش کلونینگ ژن انتروتوکسین باکتری C. perfringens در ایران می باشد. این پژوهش می تواند در تولید واکسن های نوترکیب موثر واقع شود.

کلیدواژه ها:

، C. Perfringens ، انتروتوکسین ، کلونینگ ، NDA نوترکیب