بهینه سازی شرایط کلونینگ و بیان آنزیم DNA پلیمراز باکتری ترموس آکواتیکوس در وکتور بیانی pET28a

آنزیم DNA پلیمراز Iباکتری ترموس آکواتیکوس (Taq) یکی از آنزیم های اصلی مورد استفاده در واکنش زنجیره ای پلی مرازمی باشد. این آنزیم تاکنون در بسیاری از وکتورها کلون و بیان شده است. از میان وکتورهای مختلف، وکتورهای خانواده PET که دارای پروموتر T7 می باشند نتایج مناسبی را در بیان اکثر پروتیین ها نشان می دهند. کلون کردن قطعات DNA پروسه ای است که جزییات آن به طور کامل مشخص نبوده و نیازمند بهینه سازی می باشد. در این مطالعه ژن آنزیم DNA پلیمراز باکتری ترموس آکواتیکوس با استفاده از آنزیم های محدودگر در وکتور pET28a کلون و بیان آن در شرایط گوناگون بررسی گردید. طی این مطالعه تمامی مراحل کلونینگ ازجمله شرایط مناسب برش با آنزیم محدودگر، اتصال وترانسفورم کردن باکتری E coli و همچنین شرایط بیان آنزیم بررسی و بهینه سازی شد.DNA در نتیجه، آنزیم DNA پلیمراز Taq بطورموفق آمیزی در وکتور PET28a کلون شده، بیان و خالص گردید.

کلیدواژه ها:

آنزیم DNA پلیمراز باکتری ترموس آکواتیکوس ، وکتور pET28a ، واکنش زنجیره ای پلی مراز ، کلونینگ