بهینه سازی ترکیب محیط کشت به منظور تولید پروتیین DT-GCSF با استفاده از باکتری نوترکیب اشریشیاکلی در فلاسک لرزان

سال انتشار: 1396
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: فارسی
مشاهده: 797

فایل این مقاله در 8 صفحه با فرمت PDF و WORD قابل دریافت می باشد

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این مقاله:

شناسه ملی سند علمی:

BIOTECH01_047

تاریخ نمایه سازی: 13 شهریور 1396

چکیده مقاله:

ایمونوتوکسین ها پروتیین های هیبریدی هدفمند، در راستای درمان سرطان می باشند، که از دو بخش ایمنی وتوکسینی تشکیل شده اند و به وسیله ی رابط های مشخصی به یکدیگر متصل می شوند DT-GCSF .متشکل از توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد گرانولوسیت GCSF انسانی،جهت درمان لوکمیای میلویید حادAML می باشد. در این تحقیق بهینه سازی ترکیب محیط کشت پیچیده به منظور بیان ایمونوتوکسین DT-GCSF بررسی شده است.جهت بیان DT-GCSF از باکتری سویهBL21(DE3) ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیبpET21b استفاده گردید. نوع محیط کشت ( Glucose LB+5g/l، SB،TB ) مقدار القاگر IPTG 0.05،0.1، mM 0.2 زمان القا 0.7 ، 2، 3.5 دمای القا (37 ،32 ، C °28) برای افزایش بیان در کشت فلاسک لرزان بر اساس روش تاگوجی بهینه سازی شده است. غلظت سلول بر اساس روش کدورت سنجی اندازه گیری شده و میزان بیان پروتیین توسط الکتروفورز روی ژلSDS-PAGE مورد بررسی قرار گرفته است. طبق نتایج بدست آمده محیط کشت TB شامل : g/l ( 5/12 K2HPO4: ، 3/2: KH2PO4 ،24 Yeast extract:، 12 peptone: ، 5: Glycerol)به عنوان محیط کشت بهینه تعیین شد. بهترین زمان القاء توسط IPTG با غلظت mM05/0، در دمایC °37 در کدورت نوری 3.5=OD600nm تعیین شد . بیشترین مقدار تولید بیومس و بیان پروتیین هدف در محیط کشت بهینه سازی شده به میزان.3.6=OD600nm تعیین گردید.

نویسندگان

مریم قاید رحمت

دانشجوی کارشناسی ارشد، مهندسی شیمی-بیوتکنولوژی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر

سیدمرتضی رباط جزی

استادیار گروه مهندسی شیمی-بیوتکنولوژی، پژوهشکده علوم و فناوری های زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر

مهدی زین الدین

دانشیار، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران

ولی اله بابایی پور

دانشیار، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران