بررسی کارآیی برخی روش های سرولوژیکی و مبتنی بر PCR در تشخیص و ردیابی باکتری عامل بیماری آتشک درختان میوه دانه دار

بیماری آتشک با عامل باکتریایی Erwinia amylovora از بیماری های مهم میوه های دانه دار محسوب میشود. این بیماری طی سالهای گذشته خسارت های هنگفتی به باغ های میوه دانه دار ایران تحمیل نموده است. استفاده از روش های دقیق و قابل اطمینان جهت شناسایی و ردیابی به موقع بیمارگر، به کنترل زود هنگام و جلوگیری از گسترش بیماری و حذف درختان آلوده کمک مینماید. در این تحقیق دو آنتی سرم پلی کلونال اختصاصی تهیه شده و برای ردیابی سلولهای باکتری E. amylovora (Ea) در آزمون های نشت در آگار و DIBA مورد استفاده قرار گرفتند. آزمون دیبا قادر به ردیابی 1×7 10 سلول باکتری در هر میلی لیتر کشت خالص و نیز عصاره آلوده بود. با غنی سازی در محیط مایع کینگ بی، سطح حساسیت دیبا به 10 سلول افزایش یافت. در این بررسی کارایی روشهای سرولوژیکی با برخی از روشهای مبتنی بر PCR که جهت شناسایی این باکتری منتشر شده اند نیز مقایسه گردید. به این منظور قطعه ای یک کیلو بازی از پلازمید pEA29 بنام pstI با استفاده از آغازگرهایAوB در روش PCR تکثیر گردید. سطوح حساسیت این روش در آب و عصاره گیاهی به ترتیب 2×104 و2×106 سلول در مخلوط واکنش بود سه روش ذکر شده قادر به شناسایی استرین های متعلق به میزبانها و مناطق مختلف کشور بوده و جهت شناساییEaدر مقایسه با سایر جنس های باکتریایی اختصاصی عمل نمودند. درNested-PCR با استفاده از آغازگرهای AJ75وAJ76 یک قطعه800 جفت بازی تکثیر گردید. این روش بسیار حساس توانست در مخلوط واکنش تا یک سلول باکتریایی را در آب و تا 100 سلول را در عصاره گیاهی ردیابی نماید

کلیدواژه ها:

سرولوژی ، ردیابی ، دیباNested-PCR ، Erwinia amylovora ،