آنتاگونیست رسپتور اینترلوکین- 1 انسانی: کلونینگ، بیان و بهینه سازی در میزبان E.coli

مقدمه وهدف: آنتاگونیست رسپتور IL-1Ra) IL-1) یک سایتوکاین ضد التهابی قوی است که باعث محدود کردن اثرات التهابی مربوط به اینترلوکین IL-1)1) می شود . بعلت تشابه ساختمانی با IL-1Ra ،IL-1 به طور رقابتی به رسپتور IL-1 متصل می شود ولی هیچ سیگنالی را القا نمی کند . بنابراین در درمان افراد مبتلا به بیماری های التهابی نظیر آرتریت روماتوئید بکار می رود. هدف از مطالعه حاضر کلون کردن، بیان و بهینه سازی بیان این پروتئین در E.coli می باشد. روش کار: دراین مطالعه تجربی قطعه ی ژنی سنتزی مربوط به IL-IRa به وسیله PCR تکثیر داده شد. پس ازبرش دو آنزیمی، این قطعه در وکتور بیانی pET28a کلون گردید. بیان ژن مورد نظر ابتدا در سطح mRNA به روش RT-PCR و سپس در سطح پروتئین به روش SDS-PAGE مورد برسی قرار گرفت و برای تایید پروتئین بیان شد ه از وسترن بلات استفاده گردید. بهینه سازی بیان نیز در غلظت های مختلف IPTG و مدت زمان های مختلف بعد از القاء صورت گرفت. نتایج: به کمک روش کلنی- PCR و هضم دو آنزیمی، کلون شدن قطعه ی ژنی مورد نظر در وکتور بیانی pET28a مشخص شد. رونویسی از ژن کلون شده و بیان با لای پروتئین نوترکیب به ترتیب به روش RT-PCR و SDS-PAGE مشاهده شد. نتیجه ی حاصل از الکتروفورز پروتئین نیز با روش وسترن بلات تایید گردید . میزان بیان در غلظت های مختلف القاءکننده و مدت زمان پس از القاء بهینه سازی گردید. نتیجه نهایی: نتایج حاصل از مطالعه نشان دهنده ی بیان بالای این پروتئین در میزبان E.coli به وسیله وکتور بیانی pET28a بود.این مطالعه هم چنین نشان داد رابطه مستقیمی با افزایش بیان و مدت زمان برداشت سلول ها پس از القاء وجود دارد، لذا القاء با غلظت 1 میلی مولار IPTGبه مدت یک شب برای بیان بالای پروتئین پیشنهاد می گردد.

کلیدواژه ها:

التهاب روماتیسمی مفصل ، پروتئین نوترکیب ، سیتوکاین ها ، گیرنده های اینترلوکین-1