شناسایی اپی توپهای سلولهای CD(4)(+)T در پروتئین ترشحی MPB51 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در موشهای C57BL/6

مقدمه و هدف: سلولهای T کمکی نوع یک (Th1) و لنفوسیت های CD8(+)T نقش بسزایی در برقراری حفاظت مقابل عفونت به مایکوباکتریوم توبرکلوزیس دارند . واکسیناسیون با MPB51 موجب بروز پاسخ های سلولی Th1 و برقراری حفاظت در مدلهای حیوانی توبرکلوزیس می شود . هدف از این مطالعه شناسایی اپی توپهای غالب لنفوسیتهای T از مولکول MPB51 در موش های C57BL/6 می باشد. روش کار: DNA کدکننده مولکول MPB51 ابتدا در پلاسمیدهای pCI کلون گردید . پس از ایجاد گلوله های ژنی حاوی ذرات طلای پوشیده شده از ژن MPB51، با استفاده از تفنگ ژنی (Gene gun) موش های نژاد C57BL/6 واکسیناسیون شدند. دوهفته بعد از آخرین ایمن سازی سلولهای طحالی استخراج شد و در پلیتهای کشت سلولی در حضور یا عدم حضور کتابخانه ای از پپتیدهای هم پوشان سنتتیک حاوی توالی کامل مولکول MPB51 در محیط کشت RPMI1640 حاوی FCS10% کشت داده شد. تولید IFN-γ داخل سلولی و سوپ کشت سلولی به ترتیب با روش فلوسیتومتری و ELISA بررسی گردید. نتایج : تعیین نقشه اپی توپهای سلول T طحالی با تحریک مجدد با پپتید ها ی ساختگی ٢٠ اسید آمینه ای کل مولکول MPB51، نشان داد که واکسیناسیون DNA باعث ایجاد پاسخ ایمنی در برابر پپتید های 190P171 و 210P191 می شود. آنالیزهای بیشتر با استفاده از حذف دستجات سلولهای T و آنالیز رقت نشان داد اپی توپهای P171 و P191 به ترتیب اپی توپ غالب و نیمه غالب سلول CD(4)(+)T محدود به مولکولهای (H(2)-A(b محسوب می شود. نتیجه نهائی : واکسیناسیون با DNA پلاسمیدی حاوی مولکول MPB51 علاوه بر آنکه موجب ایج اد پاسخهای اختصاصی سلولهای CD(4)(+)T می گردد، روش مناسبی برای شناسایی پپتید های ایمونوژن می باشد.

کلیدواژه ها:

اپی توپ سلول تی ، سل ، شناسایی اپی توپ ، موش