همسانه سازی (کلونینگ)، تخلیص و مطالعه برخی خصوصیات ایمونوپاتولوژیک بخش هیدروفیلیک (122-2) آنتی ژن Core ویروس هپاتیت C به دنبال ابراز آن در سیستم پروموتر araBAD در E.coli

عفونتهای ناشی از ویروس هپاتیت C یکی از مسائل بسیار عمده بهداشت جهانی می باشد. آنتی ژن کپسید یا Core ویروس هپاتیت c یکی از کلیدی ترین پروتئینهای این ویروس در پاتوژنز و بحثهای تشخیصی مربوط به این ویروس می باشد. بسیاری از مسائل مربوط به بیماری زائی این آنتی ژن از قبیل اتصال به RNA و DNA و فعالیتهای مربوط به تغییر مسیرهای ابراز ژن های اصلی، آپوپتوز، ترانسفورماسیون و تداخل در سیستم ایمنی در سلولهای میزبان مربوط به بخش هیدروفیل (آمینواسید 122-2) پروتئین Core ویروس هپاتیت C می باشد. از آنجا که برای فعالیتهای تحقیقی و تشخیصی به مقادیر زیادی از بخش هیدروفیلیک این پروتئین در شکل ساختمان طبیعی و Native احتیاج است در تحقیق حاضر برای نخستین بار امکان تولید انبوه و تخلیص آن در شکل طبیعی با کاربرد سیستم پروموتری araBAD و T7 تحت القاء آرابینوز، صورت گرفت. ژن مربوطه پس از تکثیر به روش PCR و کلونینگ در وکتور pIVEX2.3 و تایید سکانس و ساختار نهائی به وسیله آنالیز هضمی، در باکتری BL21-AI ترانسفورم و پس از بهینه سازی شرایط بیان، تخلیص پروتئین توسط ستون آگاروز ژل Ni-NTA صورت گرفت و بازدهی برابر 3/5 mg/L برای پروتئین تخلیص شده بدست آمد. بررسی های ایونولوژیک توسط وسترن بلات با مونوکلونال آنتی بادی های علیه HCV Core و نتایج آزمایشات الایزا در قابلیت اتصال این آنتی ژن به Fcγ انسانی نشان دهنده آن بود که پروتئین در شکل ساختمانی کاملاًً طبیعی (Native) بدست آمده است و در نتیجه امکان بکارگیری آن در کاربردهای تشخیصی و تحقیقی را به طور کامل دارا می باشد.