جداسازی و تولید فرم نوترکیب آنزیم گالاکتوز دهیدروژناز شناسایی شده از باکتری سودوموناس فلورسانس JK-91

زمینه و هدف: گالاکتوز دهیدروژناز، آنزیمی از خانواده دهیدروژناز ها است. این آنزیم با تعیین و اندازه گیری اختصاصی گالاکتوز 1- فسفات، نقش مهمی درطراحی و ساخت کیت های غربالگری بیماری گالاکتوزمی دارد. هدف از این پژوهش، تولید فرم نوترکیب آنزیم گالاکتوز دهیدروژناز شناسایی شده از سوش بومی سودموناس فلورسانس جداسازی شده از مناطق ساحلی استان هرمزگان بود. روش ها: ابتدا ژن آنزیم مربوطه با استفاده از تکنیک های متداول جداشده و سپس با کمک روش های مهندسی ژنتیک فرم نوترکیب آن تولید شد. بیان آنزیم نوترکیب توسط روش های سنجش فعالیت بیولوژیک و SDS- PAGE تایید شده و با استفاده از روش کروماتوگرافی تمایلی تخلیص گردید. خصوصیات کینتیکی و فیزیک وشیمیایی آنزیم تولید شده نظیر پارامتر های کینتیکی، دما و pH بهینه ی فعالیت، پایداری آنزیم و جرم مولکولی توسط روش هایی نظیر کروماتوگرافی ژل فیلتر اسیون مطالعه شدند. نتایج: بهترین شرایط تولید گالاکتوز دهیدروژناز نوترکیب با IPTG ا1 میلی مولار در دمای 30 درجه سانتی گرادو زمان القاء 6 ساعت بدست آمد. فعالیت آنزیم تولید شده، 3300U/ml محاسبه شد و ترادف نوکلئوتیدی آنزیم، پروتئینی به طول 308 آمینواسید را کد می نمود و وزن مولکولی هر زیر واحد توسط الکتروفورز SDS-PAGE ، ا34 کیلو دالتون محاسبه شد. بطورخلاصه، فرم نو ترکیب گالاکتوز دهیدروژناز از سودموناس فلورسانس تولید شد و خصوصیات کینتیکی و فیزیک وشیمیایی آن مطالعه گردیدند. مرحله بعدی تحقیق،بررسی کاربرد آنزیم ذکر شده در طراحی کیت می باشد.

کلیدواژه ها:

کلونینگ ، بیان ، گالاکتوز دهیدروژناز ، سودموناس فلورسانس