CAL- مطالعه عوامل مهم موثر برروی انتقال ژن با آگروباکتریوم به گیاه گوجه فرنگی واریتهJN3

در این تحقیق مورد مطالعه قرار CAL-JN عوامل مؤثر بر روی انتقال ژن از طریق آگروباکتریوم به گیاه گوجه فرنگی واریته 3 که در درون شیشه ودر CAL-JN گرفت .ریز نمونه های کوتیلدونی به دست آمده از گیاه گوجه فرنگی 11 روزه ی واریته 3که حاوی ژن گزینشگر Pcambia حامل ناقل 1304 LBA فیتوترون کشت شده بود با آگروباکتریوم تومورزا سویه 4404 % مقاومت به هیگرومایسین (بیان کننده هیگرومایسین فسفوترانسفراز) وژن پروانسولین انسانی هست تلقیح شد کارآیی انتقال 31 که در این تحقیق بررسی CAL-JN در شرایط ایده آل به دست آمد شرایط مطلوب انتقال ژن توسط آگروباکتریوم به واریته 3 جامد MS وبهینه شدند عبارت بودند از:قرار گرفتن ریزنمونه های کوتیلدونی 11 روزه در محیط کشت پیش تیمار شامل( 1 48 ساعت سپس آلودگی نمونه های کوتیلدونی باسوسپانسیون - به مدت 24 (TDZ 2 ازهورمون 2 mgL - 30 ساکارز+ 1 grL -1 + به مدت 10 دقیقه وبعد از خشک کردن نمونه ها ، به مدت 24 ساعت در محیط هم کشتی OD 260= آگروباکتریومی با 1 2 mgL - 30 ساکارز+ 1 grL - جامد+ 1 MS ) مشابه محیط پیش تیمارقرارگرفتند وسپس به محیط کشت پیش انتخابی حاوی 300 روز تعیین شد مدت mgL - سفوتاکسیم) انتقال یافتند بهترین غلظت آنتی بیوتیک سفوتاکسیم گیاه 1 +TDZ هورمون 4روز در این تیمار قرارگرفت. در مرحله بعدی نمونه ها به محیط کشت انتخابی انتقال یافتند که علاوه برترکیبات بالا حاوی آنتی بیوتیک هیگرومایسین بهترین غلظت آنتی بیوتیک هیگرومایسین برای جدا کردن گیاهان تراریخته احتمالی طی آزمایشی 25 |میلیگرم بر لیتر تعیین شد. وجود ژن مقاومت وپروانسولین در گیاهان رشد یافته در محیط کشت انتخابی حاوی هیگرومایسین با به اثبات رسید .. PCR3

کلیدواژه ها:

آگروباکتریوم تومور زا ، انتقال ژن ، گیاه تراریخته