بررسی تلقیح برگ توتون با آگروباکتریوم رایزوژنز و افزایش متابولیت های ثانویه در گیاه تراریخت

انتقال T-DNA از پلاسمید آگروباکتریوم رایزوژنز به بافت میزبان موجب ایجاد ریشه مویی و افزایش متابولیت های ثانویه می شود. در این تحقیق سعی شد تا امکان تلقیح بافت برگ توتون با آگروباکتریوم رایزوژنز و باززایی گیاهان با میزان نیکوتین و فنل بالا بررسی شود. جهت اجرای این طرح، بذر استریل توتون رقم کا 326 در محیط ای نویترو کشت شد. قطعات جدا کشت برگ بوته های جوان پس از غوطه وری در سوسپانسیون آگروباکتریوم رایزوژنز سویه 15834، به محیط کشت MS حاوی سفاتوکسیم منتقل شدند. ریشه های مویین ایجاد شده جهت تکثیر در محیط کشت MS مایع بدون هورمون روی شیکر قرار گرفتند. تعدادی از ریشه های مویین که قابلیت تکثیر بیشتری نسبت به سایرین داشتند، به محیط کشت باززایی MS منتقل شدند. گیاهچه های القاشده پس از ریشه زایی و سازگاری با محیط به گلدان و اتاقک رشد انتقال داده شدند. برای تایید حضور ژن پلاسمید آگروباکتریوم در ژنوم گیاه، DNA برگ، ریشه، ریشه مویین توتون ترنسفرم و پلاسمید باکتری استخراج، رنگ آمیزی و مشاهده گردید. قطعه 248 جفت بازی مربوط به ژن rolA در پلاسمید باکتری و در برگ، ریشه و ریشه مویین توتون ترنسفرم نیز مشاهده گردید. لذا این امر نشانگر انتقال موفق و پایدار ژن مورد نظر از پلاسمید باکتری به ژنوم گیاه توتون می باشد. نتایج تجزیه واریانس صفات سرعت رشد ریشه و نیکوتین در لاین های ریشه مویین ترنسفرم تفاوت معنی داری را بین لاین ها نشان داد. بررسی میزان نیکوتین و فنل گیاهچه های ترنسفرم به عنوان مهمترین متابولیت های ثانویه و مقایسه آنها با مقادیر گیاهچه های شاهد نشان داد که میزان نیکوتین ریشه تا 350% نیکوتین برگ تا 330% و فنل برگ تا 185% افزایش یافته است.

کلیدواژه ها:

آگروباکتریوم رایزوژنز ، توتون ، تراریخت ، متابولیت های ثانویه