کلونینگ و بیان آنزیم بتاگلوکاناز جداسازی شده از باکتری گرمادوستCohnella A01

آنزیم های بتا گلوکاناز غیر سلولیتیک ازجمله آنزیم های هیدرولیز کننده ی بتاگلوکان دیواره ی سلولی قارچها و مخمر می باشد که توسط برخی گیاهان و قارچ های همزیست با گیاه، در هنگام حمله ی قارچهای پاتوژن به گیاه، ساخته و ترشح می شوند و دارای عملکرد دفاعی در برابر قارچ های پاتوژن می باشند. هدف از این پژوهش کلون کردن ژن بتاگلوکاناز و بیان آن در باکتریE. coliمی باشد. در این تحقیقDNAباکتری گرمادوست بومیCohnella A01 استخراج شد و ژن مورد نظر با استفاده از پرایمرهای مناسب و طی واکنش زنجیره ای پلیمرازPCRتکثیر شد. قطعه ی ژن مورد نظر توسط آنزم های محدودکننده برش داده شد و مستقیما وارد وکتور بیانی pET 26bگردید. تایید حضور ژن مورد نظر در وکتور بیانی از طریقPCRهضم آنزیمی، و تعیین توالی نوکلئوتیدی صورت گرفت. بیان آنزیم بتا گلوکاناز در باکتری بیانیBL21 با اضافه کردن غلظت های(Isopropyl beta-D IPTG 0.1 از , 0.15, 0.05 mM thiogalactopyranoside)القا شد و سپس توسط SDS-PAGEمورد بررسی قرار گرفت. الکتروفورز محصولPCRو همچنین هضم آنزیمی وکتور pET26b نوترکیب، باند ژن مورد نظر را نشان داد. آنالیزSDS- PAGEنشان دهنده ی یک باند بیانی پروتئین مورد نظر بود که در اثر القای بیان باIPTGتولید شده بود. در این مطالعه ژن بتا گلوکاناز با موفقیت در باکتریBL21 از سویه های E.Coliکلون و بیان شد. وکتور نوترکیب به منظور بهینه سازی بیان بتا گلوکاناز در باکتریE.coliاستفاده شد

کلیدواژه ها:

بتا گلوکاناز ، Cohnella A01 ، کلون و بیان ، اشرشیا کلی ، آنزیم گرمادوست