بهینهسازی انتقال ژن به سلولهایRPE توسط وکتورAAV

سلولهای اپیتلیالی رنگدانهدارRPE شبکیه در مجاورت فتورسپتورها قرار گرفتهاند و وظایف گوناگونی بر عهده دارند. نقص درعملکرد این سلولها منجر به بیماریهای تحلیلبرندهی شبکیه چشم میشود. تاکنون مطالعات گستردهای جهت انتقال ژن به این سلولهاانجام شده است. یکی از سیستمهای کارآمد برای انتقال ژن به این سلولها سیستم( AAV) Adeno Associated Virus است هدف از این مطالعه انتخاب روش مناسب آلودهسازی با کارایی بالا برای سلولهای RPEتوسط این سیستم ویروسی است روشها: روشهای فیزیکی و شیمیایی ترانسفکشن بر کشت سلولهای RPE توسط وکتور گزارشگرpAAV- LacZ انجام شد. پس از رنگآمیزی X-Gal بیان ژن در حد مورد انتظار مشاهده نشد. جهت بهبود بیان ژن تولید ویروسAAV- LacZ در سلولهای HEK293Tانجام شد. سلولهایRPE با ویروسهای تولید شده در مقادیر مختلف ویروس و به دو روش تکلایهای و سوسپانسیون آلوده شدند. نتایج: روشهای فیزیکی و شیمیایی ترانسفکشن تنها 3% از بیان ژن گزارشگر را در سلولهایRPE نشان داد در حالی که روش آلوده سازی توسط ویروس، بیان قابل ملاحظهای از ژن گزارشگر را در سلولهای RPE نشان داد. در میان روشهای مطالعه شده، روش آلوده سازی سوسپانس بهترین نتیجه را نشان داد در شرایطی که با غلظت پایین ویروس بیان بالای 90 % ژن مشاهده شد نتیجهگیری: در گزارشات متعدد نشان داده شده که سلولهایRPEتوانایی ترانسفکت ناچیزی دارند استفاده از روشهای ترانسفکشن در مطالعات بیان ژن در این سلولها پیشنهاد نمیشود. نتایج این مطالعه نشان داد استفاده از ویروس AAV که دارای گیرنده هپاران سولفات در سطح سلولهای RPEاست میتواند راهگشای انتقال ژن به این سلولها باشد

کلیدواژه ها:

انتقال ژن ، سلولهای اپیتلیالی رنگدانهدار شبکیه ، ویروسهای مرتبط با آدنوویروس