تکثیر و کلونینگ ژنFol-SIX1با هدف ساخت سازه بیانیpCaS1

ژنهایSIX که ازFusarium oxysporum f. sp lycopersici (Fol)گزارش شده اند، نقش مهمی را در برهمکنش قارچ باگیاهان گوجه فرنگی بازی می کنند. اخیرا همولوگ این ژنها در بعضی از فرم های اختصاصی دیگر نیز شناسائی شده اند. به منظورارزیابی نقش احتمالی ژنSIX1در برهمکنش 2 میان لاینهای ملون و فرم اختصاصیF. oxysporum f. sp. melonisاز روش بیان موقت 3 ژن افکتور در سیستم هترولوگ استفاده می شود. بدین منظور براساس اطلاعات ژنومFolیک جفت آغازگر اختصاصی دارای سایت آنزیمیNcoIطراحی شد و به منظور جداسازی ژنFol-SIX1 واکنشPCRانجام شد. محصولPCRیک باند اختصاصی را دراندازه مورد نظر نشان داد. محصولPCRدر وکتورpTG19کلون شد و کلنی های نوترکیب با استفاده از پرایمرهای PSh10.2F/51-R شناسایی شدند. تعدادی از کلنی ها با استفاده از واکنش کلنیPCRتایید شدند. جهت قطعه کلون شده با استفاده از الگوی هضم آنزیمی باآنزیمDraIIIمشخص شد. سازه حاوی قطعه کلون شده با جهت سنس دو باند حدود 3000 و 1000 جفت باز تولید کرد که مطابق بااندازه مورد انتظار بود. برای ساخت وکتور بیانیpCaS1قطعهNcoI:: NcoIدر ناحیه مشابه در وکتور جفتی pCAMBIA3301کلون می شود

کلیدواژه ها:

ترشح در آوند چوبی ، ژن افکتور ، وکتور بیانی ، Fusarium oxysporum f. sp. Lycopersici ، Fol-SIX1