افزایش ابراز فلاژلین نوترکیب درفرم محلول توسط چپرون شیمیایی

فلاژل عامل حرکت در سالمونلاست که در کلونیزاسیون این باکتری نقش ایفا می کند . فلاژلین واحد ساختاری تشکیل دهنده فیلامنت فلاژلار است که به عنوان یاور واکسن مطرح می باشد. تولید فلاژلین سالمونلا اینتریتیدیس به صورت نوترکیب به دلیل حذفمیکروارگانیزم پاتوژن از فرایند تولید آن و ایمنی بالاتر فرایند تولید مورد توجه می باشد. اشرشیا کولی میزبانی مناسب برای ابراز پروتئینهای نوترکیب می باشد که مشکل اصلی آن تشکیل اینکلوژن بادی است. اینکلوژن بادی توده ای از پروتئین ها در فرم غیر فعال است کهبازیابی پروتئین ها از آن معمولا بازدهی پایینی دارد. نتایج تحقیقات قبلی نشان دهنده آن است که استفاده از چپرون های شیمیاییراهکاری مناسب برای افزایش تولید پروتئین نوترکیب در فرم محلول وفعال می باشد. هدف این پروژه تعیین روشی مناسب برای افزایش ابراز فلاژلین نوترکیب در فرم محلول آن است. برای این منظور در این پروژه ژن فلاژلینSalmonella enteritidis SGSC2475و دوایزوله ایرانی سالمونلا انتریتیدیس با استفاده از وکتورpET28aدر باکتریEscherichia coli BL21(DE3 کلون شد. به منظور ابراز ژن فلاژلین القای پروموتورT7با استفاده از ایزوپروپیل -بتا -دی-گالاکتوزیدIPTG با غلظت1mMانجام شد. آنالیز ابراز ژن و حلالیت پروتئین با استفاده ازSDS-PAGEو دانسیتومتری ژل رنگ شده با استفاده از کوماسی بریلینت بلوCBBصورت گرفت. برای بررسی تاثیر آرژنین بر حلالیت فلاژلین، غلظت های مختلف آرژنین در محیط کشت مورد استفاده قرار گرفتند. نتایج تعیین توالی نشان دهنده یکسان بودن توالی ژن فلاژلین در سه سویه مورد آزمایش سالمونلا انتریتیدیس بوده است

کلیدواژه ها:

فلاژلین ، پروتئین نوترکیب ، چپرون شیمیایی ، آرژنین ، حلالیت