همسانه سازی فاکتور رشد عصب انسانیNGF نوترکیب در وکتور ویروسیPVX

جهت بیان یک ژن نوترکیب سیستمهای گوناگونی ارائه شده است، لذا تعیین سیستمی با بیشترین بازده تولید پروتئینهای نوترکیب امری ضروری میباشد. گیاهان تراریخته جایگزین مناسبی برای سیستمهای رایج بیان کننده پروتئینهای نوترکیب مانند کشت سلولهایجانوری و پروکاریوتی میباشند. گیاهان نسبت به سایر سیستمهای تولید از نظر اقتصادی به صرفهتر بوده و به دلیل عدم پاتوژنهای انسانی سیستمهایی ایمن بشمار می آیند و همچنین امکان تولید حجم انبوهی از پروتئینهای نوترکیب در گیاهان وجود دارد و پروتئینهای بیگانهای که در گیاهان بیان میشوند ساختار اصلی خود را حفظ میکنند و بنابراین به عنوان یک میزبان مناسب برای بیان پروتئینهای دارویی با منشا یوکاریوتی مطرح میباشندb-NGF (beta-Nerve growth factor)یک فاکتور نوروتروپیک است که برای رشد وبقای نورونهای حسی مورد نیاز است. پتانسیل درمانی،b-NGFشامل عصب درمانیهای محیطی در بیماران دیابتی و بیماران با عوارض جانبی ناشی از درمانهای شیمیایی میباشد. پتانسیل دیگر آن شامل عصب درمانیهای مرکزی نظیر بیماری آلزایمر که همراه با تحلیل نورونهای کولینرژیک است، میباشد. بنابراین تولید آن به عنوان یک پروتئین نوترکیب حائز اهمیت است. در این پژوهش، ژن کد کننده پروتئینNGFانسانی حاوی توالی 800 جفت بازی که از سه بخشMature و Pro ،Preتشکیل شده، طراحی و در ناقل بیانی pGR107تحت کنترل پروموتر(cauliflower mosaic virus) CaMV 35Sکلون گردید. ناقل بیانی حاوی ژن مورد نظر، در باکتریE. coliتکثیر و سپس به باکتریAgrobacterium tumefaciensسویهLBA4404منتقل گردید. با انجام آزمایشات colony PCR و double digestionهمسانه سازی ژن مورد نظر تأیید گردید

کلیدواژه ها:

آگروباکتریوم ، فاکتور رشد عصب انسانی ، پروتئین نوترکیب ، بیان در گیاه ، همسانهسازی