طراحی و سنتز کانستراکت بیانی ژن کلسیتونین انسانی نوترکیب در ریزجلبکChlamydomonas Reinhardtii

کلسیتونین هورمون پپتیدی کوچکی میباشد که در انسان توسط سلولهای پارافولیکولار تیروئید ترشح شده و در تنظیم متابولیسم کلسیم و فسفر نقش ایفا کرده و تنظیم کننده هوموستازی کلسیم است. کاربرد دارویی کلسیتونین در درمان بیماریهای مربوط به کلسیم وبیماریهای استخوانی میباشد. ویژگی ساختمانی مهم کلسیتونین، آمیداسیون انتهای کربوکسیل آن است که نقش اساسی در فعالیت آن ایفا میکند. از آنجا که آمیداسیون یک تغییر پس از ترجمه ویژه سلولهای جانوری است، تولید کلسیتونین نوترکیب توسط میزبانهای باکتریال یا مخمرها نیازمند یک مرحله آمیداسیون پس از استخراج میباشد و جهت تولید فرم فعال آن از کشت سلولهای جانوری استفادهمیشود. اخیراً استفاده از ریزجلبکها جهت بیان پروتئین نوترکیب مورد توجه زیادی قرار گرفته است. ریزجلبکها ارگانیزمهایی یوکاریوت و فتوسنتتیک بوده و واجد تمامی خصوصیات مطلوب نظیر امکان کشت آسان، سرعت رشد و ایمنی بالا، سهولت دستورزیژنتیکی و قابلیت تولید پروتئینهای پیچیده و اعمال تغییرات پس از ترجمه جهت تولید پروتئین نوترکیب هستندChlamydomonas Reinhardtiiشناختهشدهترین گونه ریزجلبک میباشد که جهت بیان پروتئینهای نوترکیب مورد استفاده قرار گرفته است. در این مطالعه جهت بررسی امکان بیان ترشحی کلسیتونین نوترکیب در Chlamydomonas Reinhardtiiژن کلسیتونین به همراه ژن کلسیتونین به همراهتوالی نشانه ترشحی، اینترونCop1 3’ UTR و RbcS2 در وکتورpChlamy تحت کنترل پروموتر تلفیقیHSP70-RbcS2 کلون گردید. پلاسمید نوترکیب پس از خطی شدن به روش الکتروپوراسیون به سلولChlamydomonas ReinhardtiiسویهCW15 که فاقد دیواره است، منتقل و با توجه به بیان ترشحی محصول، پس از رشد سویه نوترکیب، محیط کشت آن جمعآوری شده و جهت تاییدحضور کلسیتونین بررسی میگردد

کلیدواژه ها:

کلسیتونین ، آمیداسیون ، ریزجلبک ، Chlamydomonas Reinhardtii